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PCR產(chǎn)物酶切連接pET 28a，測(cè)序發(fā)現(xiàn)引物部分堿基缺一個(gè)C
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最近實(shí)驗(yàn)一直不順利，各種突變和缺失，累覺不愛。 上游引物加了保護(hù)堿基和Ndel/Xbal酶切位點(diǎn)，引物開頭是5’-tctagaCATATGGCCAG......... 測(cè)序回來，峰圖很干凈，完全沒有套峰。 突變的堿基就不管了，但是開頭CATATGGCAG， 少了個(gè)C�。�！后面都亂碼了，跪。。。。。 問了生工測(cè)序，也回答說測(cè)序沒問題。 我覺得也不該是KOD酶的問題吧，畢竟在引物上呢，也能突變?nèi)笔幔繒?huì)不會(huì)是引物本身少了C導(dǎo)致的，雖然檢測(cè)報(bào)告寫的正常。 |
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xn8008: 金幣+1, 歡迎發(fā)帖交流 2016-12-07 06:25:43
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我的測(cè)序開頭多了個(gè)堿基c 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
6樓2016-12-06 18:37:40
7樓2016-12-06 22:27:01
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不是，我的是插入片段。在測(cè)序結(jié)果剛開始的10bp里多。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
8樓2016-12-06 22:30:14
sky蒲公英
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引物本身有問題吧 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
10樓2016-12-06 23:01:31
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