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[交流]
PCR產(chǎn)物酶切連接pET 28a，測序發(fā)現(xiàn)引物部分堿基缺一個C
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最近實驗一直不順利，各種突變和缺失，累覺不愛。 上游引物加了保護堿基和Ndel/Xbal酶切位點，引物開頭是5’-tctagaCATATGGCCAG......... 測序回來，峰圖很干凈，完全沒有套峰。 突變的堿基就不管了，但是開頭CATATGGCAG， 少了個C�。�！后面都亂碼了，跪。。。。。 問了生工測序，也回答說測序沒問題。 我覺得也不該是KOD酶的問題吧，畢竟在引物上呢，也能突變?nèi)笔�？會不會是引物本身少了C導致的，雖然檢測報告寫的正常。 |
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3樓2016-12-06 15:04:19
2樓2016-12-06 14:21:46
781055707
木蟲 (著名寫手)
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- 專業(yè): 生物大分子結構與功能
4樓2016-12-06 16:39:26
5樓2016-12-06 18:27:53
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