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mochenmi銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
qPCR擴(kuò)增效率問題 已有1人參與
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之前查閱資料了解到要使用2-（deta,deta）Ct值分析方法，必須使目的基因與內(nèi)參基因擴(kuò)增效率一致。 因此采用cDNA梯度稀釋法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算擴(kuò)增效率。我有10個目的基因和1個內(nèi)參，得到的結(jié)果從130%到190%不等，R方均大于0.99。 想問一下：1. 擴(kuò)增效率這么高怎么辦？ 2. 另外擴(kuò)增效率不一致的話，是不是只能用雙標(biāo)準(zhǔn)曲線分析方法了？可是我有10個目的基因，只能一個一個弄嘛？急~ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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mochenmi
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稀釋比例是10x，20x，50x，100x，500x。因為我感覺cDNA不像質(zhì)粒那么好，所以沒有按10倍的梯度，應(yīng)該也可以的吧？ 儀器使用的bio-rad CFX96 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
7樓2016-12-12 21:50:28
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16樓2016-12-25 17:30:43
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2樓2016-12-11 23:43:50
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3樓2016-12-12 15:06:49
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我是按照反轉(zhuǎn)錄盒最大量反轉(zhuǎn)錄的（5ug），然后從10倍稀釋到了500倍。5個稀釋倍數(shù)做的標(biāo)準(zhǔn)曲線。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
4樓2016-12-12 16:49:24
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5樓2016-12-12 21:15:46
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6樓2016-12-12 21:16:39
8樓2016-12-12 22:16:35
9樓2016-12-12 22:17:44
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第一次知道要做這個，以前都是直接2-（deta,deta）Ct算結(jié)果了。想問下相對定量到底需不需要做這個？有人說要有人說不要，我怕到時候投稿編輯問我要擴(kuò)增效率的數(shù)據(jù)。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
10樓2016-12-12 23:49:07
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