 |
 |
 |
| 24小時(shí)熱門版塊排行榜 |
- >論壇更新日志 (2356)
- >考研 (144)
- >蟲(chóng)友互識(shí) (106)
- >導(dǎo)師招生 (90)
- >考博 (84)
- >基金申請(qǐng) (26)
- >碩博家園 (21)
- >論文投稿 (17)
- >教師之家 (16)
- >文獻(xiàn)求助 (15)
- >公派出國(guó) (11)
- >休閑灌水 (10)
- >無(wú)機(jī)/物化 (8)
- >論文道賀祈福 (7)
- >找工作 (6)
- >招聘信息布告欄 (5)
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1224 | 回復(fù): 4 | |||
[交流]
初學(xué)者對(duì)于蛋白純化的幾點(diǎn)體會(huì) 已有3人參與
|
|
近來(lái)剛接觸蛋白純化的實(shí)驗(yàn)，對(duì)于研究本來(lái)就不多的我來(lái)說(shuō)，這樣的實(shí)驗(yàn)算是一頭霧水。在不斷求知，不斷實(shí)驗(yàn)，不斷看書的過(guò)程中，現(xiàn)在有幾點(diǎn)體會(huì)，求大神們來(lái)圍觀指點(diǎn)。 先說(shuō)明一下我現(xiàn)在的實(shí)驗(yàn)，是一個(gè)有活性的酶，孢內(nèi)酶，等電點(diǎn)4~5左右，所以使用弱堿性的陰離子樹(shù)脂進(jìn)行純化。 對(duì)于大體方向的實(shí)驗(yàn)步驟，實(shí)驗(yàn)書籍中都有介紹，無(wú)非是確定樹(shù)脂的類型，確定洗脫劑以及緩沖溶液的pH。這樣再進(jìn)行洗脫劑濃度的測(cè)定。 但是在細(xì)節(jié)方面，我感覺(jué)有更多的疑問(wèn)，致使像我這樣的初學(xué)者不能進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，更為重要的是在遇到困難時(shí)如何取解決問(wèn)題，這是最為重要的。 好了，現(xiàn)在就開(kāi)始進(jìn)行我的體會(huì)之旅吧。 1、對(duì)于弱堿性陰離子樹(shù)脂，在使用中需要首先活化，一般就是堿-鹽-緩沖液。 這里有就問(wèn)題出現(xiàn)了，為了把樹(shù)脂的ph調(diào)到規(guī)定的ph需要進(jìn)行大量的緩沖液進(jìn)行沖洗，一般是利用高濃度的緩沖液調(diào)整ph后進(jìn)行沖洗，我現(xiàn)在使用的是PBS，害怕磷酸根離子結(jié)合到柱子上的多，所以我沒(méi)有這么做，我是將樹(shù)脂放置瓶中，利用鹽酸調(diào)ph，這樣快，但是步驟繁瑣，樹(shù)脂也有損失。下次想著利用高濃度的pBs試試，畢竟是更簡(jiǎn)便的方法。 2、上柱 蛋白在室溫下容易染菌，尤其是利用細(xì)菌產(chǎn)的酶，這里就需要利用低溫進(jìn)行，但是很多公司并沒(méi)有很多條件，那就放冰塊在盆子里，放樣品，進(jìn)行原始性上樣。 3.上樣量 一般是10%·30%，洗脫規(guī)律比較明顯，書本上引用的。 4、洗脫 我現(xiàn)在遇到的問(wèn)題是回收率低，提高洗脫濃度，酶活就低了，就是雜蛋白也洗出來(lái)了，這樣，我想 利用降低ph進(jìn)行優(yōu)化，具體的效果如何看下次的實(shí)驗(yàn)了。不過(guò)不報(bào)希望。因?yàn)榻档蚿h，目標(biāo)蛋白和雜蛋白的結(jié)合力都小了，容易洗脫。如果能知道主要的雜蛋白的等電點(diǎn)就好了，但是復(fù)雜的細(xì)胞，里面的酶太多，不容易找，現(xiàn)有的條件液不知道如何去鑒定。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
310求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
材料與化工272求調(diào)劑
已經(jīng)有17人回復(fù)
-
材料工程專碩求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
337求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
材料與化工328分調(diào)劑
已經(jīng)有9人回復(fù)
-
318一志愿吉林大學(xué)生物與醫(yī)藥 求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
一志愿南開(kāi)大學(xué)0710生物學(xué)359求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
085600材料與化工調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
327求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
2樓2016-12-19 16:49:11
3樓2016-12-19 16:49:47
13420180917
禁蟲(chóng) (小有名氣)
★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
|
本帖內(nèi)容被屏蔽 |
4樓2017-12-06 17:13:24
|
本帖內(nèi)容被屏蔽 |
5樓2018-08-11 21:59:08
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 z妲妲 的主題更新
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 各位老師好，我的一志愿為北京科技大學(xué)085601材料專碩 +9 | Koxui 2026-03-28 | 9/450 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +7 | Y-cap 2026-03-29 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 343求調(diào)劑085601 +3 | 要努力學(xué)習(xí)x 2026-03-29 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 356求調(diào)劑 +4 | gysy?s?a 2026-03-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 2026年華南師范大學(xué)歡迎化學(xué)，化工，生物，生醫(yī)工等專業(yè)優(yōu)秀學(xué)子加入！ +3 | llss0711 2026-03-28 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 394求調(diào)劑 +3 | 好事多磨靜候佳?/a> 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料求調(diào)劑一志愿哈工大324 +7 | 閆旭東 2026-03-28 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +3 | 希望上岸阿小楊 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 330一志愿中國(guó)海洋大學(xué) 化學(xué)工程 085602 有讀博意愿 求調(diào)劑 +3 | wywy.. 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 安徽大學(xué)專碩生物與醫(yī)藥專業(yè)(086000)324分，英語(yǔ)已過(guò)四六級(jí)，六級(jí)521，求調(diào)劑 +4 | 美味可樂(lè)雞翅 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085600，材料與化工321分調(diào)劑 +4 | 大饞小子 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 315調(diào)劑 +4 | 0860求調(diào)劑 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 333求調(diào)劑 +6 | wfh030413@ 2026-03-23 | 6/300 |
|
|
|
[考研]
 085602 289分求調(diào)劑
+8
|
WWW西西弗斯 2026-03-24 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +17 | 碩星赴 2026-03-23 | 17/850 |
|
|
|
[考研] 281求調(diào)劑 +6 | Koxui 2026-03-24 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 300分，材料，求調(diào)劑，英一數(shù)二 +5 | 超贊的 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料/農(nóng)業(yè)專業(yè)，07/08開(kāi)頭均可，過(guò)線就行 +3 | 呵唔哦豁 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿重慶大學(xué)085700資源與環(huán)境，總分308求調(diào)劑 +7 | 墨墨漠 2026-03-23 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 接收2026碩士調(diào)劑(學(xué)碩+專碩) +4 | allen-yin 2026-03-23 | 6/300 |
|