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zhangdie新蟲 (初入文壇)
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請(qǐng)問(wèn)驗(yàn)證cds全長(zhǎng)序列設(shè)計(jì)引物(cDNA模板)，后二十堿基幾乎沒(méi)有GC怎么辦
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為了設(shè)計(jì)這個(gè)引物我查了好多資料，pp5也下了學(xué)了但是驗(yàn)證cds的引物基本上只有前二十和后二十這種設(shè)計(jì)法，但我下游引物用了最后二十四個(gè)堿基CG含量才大概20%，退火溫度五十都不到，跑出條帶做了連接轉(zhuǎn)化但結(jié)果都不是目的基因。有人說(shuō)用utr區(qū)設(shè)計(jì)，但是我5‘utr只有十五個(gè)已知堿基，是需要先做個(gè)5race嗎？或者前輩們有什么別的方法？求指點(diǎn)謝謝 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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4樓2017-01-04 22:12:15
zhangdie
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我比過(guò)一次也讓師姐比過(guò)一次，兩個(gè)都是什么菌的基因序列，所以我想是不是特異性引物太差根本沒(méi)克出我要的基因，升高退火溫度就幾乎沒(méi)有條帶，降低退火還會(huì)在500bp左右出現(xiàn)一堆別的條帶。。。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2017-01-04 23:09:10
MAS_rice
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西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-01-06 07:45:02
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-01-06 07:45:02
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能擴(kuò)出來(lái)應(yīng)該可以用吧，要不然你把這個(gè)擴(kuò)出來(lái)的前段連個(gè)T載，再測(cè)序看看是不是目的前段 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2017-01-03 23:20:27
zhangdie
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做過(guò)了，挑了十個(gè)菌都出了結(jié)果位置和我目的條帶位置差不多，但測(cè)序回來(lái)都比對(duì)不上T T 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2017-01-04 15:41:08
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6樓2017-01-05 20:20:29
zhangdie
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我那個(gè)是一個(gè)植物fes基因，NCBI上沒(méi)有一樣的但是有別的植物的我看了看都是調(diào)控hsp70的照理說(shuō)是沒(méi)問(wèn)題的，但就是全長(zhǎng)去克就出不來(lái)，有沒(méi)有別的設(shè)計(jì)引物的方法啊 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
7樓2017-01-05 23:48:07
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8樓2017-01-06 21:25:08
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9樓2017-01-06 21:30:59
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10樓2017-01-06 22:10:33
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