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zhangdie新蟲 (初入文壇)
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[求助]
請(qǐng)問驗(yàn)證cds全長(zhǎng)序列設(shè)計(jì)引物(cDNA模板)，后二十堿基幾乎沒有GC怎么辦
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為了設(shè)計(jì)這個(gè)引物我查了好多資料，pp5也下了學(xué)了但是驗(yàn)證cds的引物基本上只有前二十和后二十這種設(shè)計(jì)法，但我下游引物用了最后二十四個(gè)堿基CG含量才大概20%，退火溫度五十都不到，跑出條帶做了連接轉(zhuǎn)化但結(jié)果都不是目的基因。有人說用utr區(qū)設(shè)計(jì)，但是我5‘utr只有十五個(gè)已知堿基，是需要先做個(gè)5race嗎？或者前輩們有什么別的方法？求指點(diǎn)謝謝 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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zhangdie
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3樓2017-01-04 15:41:08
MAS_rice
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西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-01-06 07:45:02
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-01-06 07:45:02
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能擴(kuò)出來應(yīng)該可以用吧，要不然你把這個(gè)擴(kuò)出來的前段連個(gè)T載，再測(cè)序看看是不是目的前段 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2017-01-03 23:20:27
MAS_rice
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4樓2017-01-04 22:12:15
zhangdie
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我比過一次也讓師姐比過一次，兩個(gè)都是什么菌的基因序列，所以我想是不是特異性引物太差根本沒克出我要的基因，升高退火溫度就幾乎沒有條帶，降低退火還會(huì)在500bp左右出現(xiàn)一堆別的條帶。。。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2017-01-04 23:09:10
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