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zhangdie新蟲 (初入文壇)
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[求助]
請問驗(yàn)證cds全長序列設(shè)計(jì)引物(cDNA模板),后二十堿基幾乎沒有GC怎么辦
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為了設(shè)計(jì)這個引物我查了好多資料,pp5也下了學(xué)了但是驗(yàn)證cds的引物基本上只有前二十和后二十這種設(shè)計(jì)法,但我下游引物用了最后二十四個堿基CG含量才大概20%,退火溫度五十都不到,跑出條帶做了連接轉(zhuǎn)化但結(jié)果都不是目的基因。有人說用utr區(qū)設(shè)計(jì),但是我5‘utr只有十五個已知堿基,是需要先做個5race嗎?或者前輩們有什么別的方法?求指點(diǎn)謝謝 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
至尊木蟲 (著名寫手)

至尊木蟲 (著名寫手)
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能擴(kuò)出來應(yīng)該可以用吧,要不然你把這個擴(kuò)出來的前段連個T載,再測序看看是不是目的前段 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |

新蟲 (初入文壇)
新蟲 (初入文壇)
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我比過一次也讓師姐比過一次,兩個都是什么菌的基因序列,所以我想是不是特異性引物太差根本沒克出我要的基因,升高退火溫度就幾乎沒有條帶,降低退火還會在500bp左右出現(xiàn)一堆別的條帶。。。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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