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[求助]
關(guān)于pull down實(shí)驗(yàn)，求大神進(jìn)來(lái)指導(dǎo)一下 已有2人參與
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| 最近做Pull down 實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證酵母雙雜交篩選的結(jié)果，在酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)中，篩選到3個(gè)可能的互作蛋白，所以再做了pull down再進(jìn)行體外驗(yàn)證，pull down 構(gòu)建目的蛋白表達(dá)時(shí)，試了很多的載體，后面只有pMAL-c2x這個(gè)載體在上清中表達(dá)我的目的蛋白，其他GST，HIS標(biāo)簽的pGEX6P-1等載體目的蛋白均在沉淀。現(xiàn)在想進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證酵母雙雜結(jié)果與目的蛋白在體外是否互作，請(qǐng)教各位我下一步是不是要構(gòu)建酵母雙雜交篩選蛋白的其他標(biāo)簽的蛋白載體？（是否只要能讓改蛋白表達(dá)就可以的標(biāo)簽載體？）然后過(guò)柱純化，掛柱，WB驗(yàn)證？請(qǐng)做過(guò)的各位老師，同學(xué)指導(dǎo)一下，謝謝 |
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5樓2017-06-05 10:06:23
11103324
銀蟲(chóng) (小有名氣)
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2樓2017-02-16 10:19:51
jurkat.1640
至尊木蟲(chóng) (文壇精英)
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3樓2017-02-16 17:24:56
ss小木瓜
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4樓2017-04-19 17:24:03
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