 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 4 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2387 | 回復(fù): 3 | |||
[交流]
質(zhì)粒DNA的提取與純化 已有2人參與
|
|
一、實驗?zāi)康呐c原理 質(zhì)粒多為一些雙鏈、環(huán)狀的DNA分子，是獨立于細(xì)菌染色體之外進行復(fù)制和遺傳的輔助性遺傳單位。質(zhì)粒是進行分子生物學(xué)實驗操作，進行遺傳工程改良物種等工作時最主要的DNA載體。 提取質(zhì)粒的基本步驟分為三步： ①細(xì)菌的培養(yǎng)和質(zhì)粒的擴增 ②細(xì)菌菌體的裂解 ③質(zhì)粒DNA的純化 本實驗采取的菌體裂解方法為堿解法，質(zhì)粒純化方法為梯度離心法。 二、材料與試劑 1、材料：大腸桿菌 2、儀器：超凈工作臺，培養(yǎng)箱，搖床，恒溫水浴鍋，臺式離心機，取液器一套，低溫冰箱，冷凍真空干燥機，電泳儀，水平電泳槽，紫外觀測儀 3、試劑： Solution I 25 mM Tris-Hcl(pH7.4) 10 mM EDTA(pH8.0) 50 mM葡萄糖 高壓滅菌，4℃保存 Solution II 0.2 M NaOH, 1%SDS 現(xiàn)配現(xiàn)用 Solution III 5 N KAc pH4.8 高壓滅菌，4℃保存 酚/氯仿 3 M NaAc PH5.2, 高壓滅菌，4℃保存。一、實驗?zāi)康呐c原理，溶菌酶（8 mg/ml）,異丙醇，酚/氯仿，無水乙醇，70％乙醇，LB培養(yǎng)基，電泳試劑 三、操作步驟 1、細(xì)菌繁殖 LB培養(yǎng)基，2 ml/20ml，37℃，200rpm，搖一搖，過夜 2、離心10 min，5000 rpm, 4℃；棄上淸液 3、沉淀（菌體細(xì)胞）預(yù)冷的TES緩沖液洗滌，離心10 min，5000 rpm, 4℃ 加入預(yù)冷的1 ml Solution I，冰浴，10 min 4、重新懸浮，加入150 ul溶菌酶母液，室溫放置5 min 5、加入1.2 ml Solution II, 冰浴，5 min 6、加入0.9 ml預(yù)冷乙酸鉀，混勻，離心10 min，12000 rpm, 4℃ 7、加入1.5 ml異丙醇，-20℃冰箱內(nèi)放置15 min 8、離心10 min，12000 rpm, 4℃ 9、取沉淀，懸于400 ul TE緩沖液中 10、加入40 ul，3 M NaAc 11、酚/氯仿，抽提，乙醇沉淀 12、離心10 min，12000 rpm, 4℃ 13、取沉淀，冷凍干燥，再懸浮于50 ul TE緩沖液中。 14、電泳檢測提取DNA的質(zhì)量 四、結(jié)果與分析 超螺旋結(jié)構(gòu)DNA |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
【求調(diào)劑】新能源材料本科，一志愿211，初試321
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
材料考研調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
材料調(diào)劑
已經(jīng)有12人回復(fù)
-
英一數(shù)一408，總分284，二戰(zhàn)真誠求調(diào)劑
已經(jīng)有14人回復(fù)
-
085410 一志愿211 22408分?jǐn)?shù)359求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
271求調(diào)劑
已經(jīng)有19人回復(fù)
-
385分 生物學(xué)（071000）求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
一志愿安徽大學(xué)計算機科學(xué)與技術(shù)學(xué)碩，331分求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
318求調(diào)劑，計算材料方向
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
291求調(diào)劑
已經(jīng)有25人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 關(guān)于提取DNA的純化問題
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 分子生物學(xué)常用實驗
已經(jīng)有128人回復(fù)
- 質(zhì)粒DNA的分離、純化和鑒定
已經(jīng)有32人回復(fù)
- 大腸桿菌培養(yǎng) 質(zhì)粒提取后困惑
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 酚氯仿法提取DNA的原理
已經(jīng)有29人回復(fù)
- 基因工程課程小結(jié)
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 現(xiàn)代分子生物學(xué)實驗技術(shù)
已經(jīng)有324人回復(fù)
- DNA的提取簡介，包括法醫(yī)DNA的提取方法！
已經(jīng)有54人回復(fù)
- 【資料】分子生物學(xué)常見問題解答
已經(jīng)有30人回復(fù)
- 【資料】生物實驗必備（很全的）
已經(jīng)有725人回復(fù)
- ------------------失效----------------
已經(jīng)有24人回復(fù)
yubeihong
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
- 應(yīng)助: 20 (小學(xué)生)
- 金幣: 7537.3
- 散金: 605
- 紅花: 40
- 帖子: 3051
- 在線: 641小時
- 蟲號: 253258
- 注冊: 2006-05-20
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化工與食品化工
2樓2017-03-02 12:55:45
Zhibao1994
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1028.3
- 紅花: 2
- 帖子: 210
- 在線: 36.3小時
- 蟲號: 6143795
- 注冊: 2017-03-25
- 專業(yè): 植物病理學(xué)
3樓2017-08-06 19:41:27
Zhibao1994
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1028.3
- 紅花: 2
- 帖子: 210
- 在線: 36.3小時
- 蟲號: 6143795
- 注冊: 2017-03-25
- 專業(yè): 植物病理學(xué)
4樓2017-08-06 19:42:24
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 Nigori 的主題更新
| 4 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料考研調(diào)劑 +3 | Gs大王 2026-04-02 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 273求調(diào)劑 +19 | 李芷新1 2026-03-31 | 19/950 |
|
|
|
[考研] 339求調(diào)劑，想調(diào)回江蘇 +7 | 烤麥芽 2026-03-27 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +8 | Lyy930824@ 2026-03-29 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 316求調(diào)劑 +9 | 舟自梗 2026-04-01 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +4 | DADA怪 2026-03-31 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 324求調(diào)劑 +4 | 想上學(xué)求調(diào) 2026-04-01 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085600，321分求調(diào)劑 +13 | 大饞小子 2026-03-31 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 086000生物與醫(yī)藥298調(diào)劑求助 +4 | 元元青青 2026-03-31 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0856調(diào)劑 +7 | 曲聽筠 2026-03-30 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 311（085601）求調(diào)劑 +12 | liziyeyeye 2026-03-28 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +9 | 小蠟新筆 2026-03-29 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 已決定調(diào)劑院校 +8 | JKSOIID 2026-03-26 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿a區(qū)211，085601-307分求調(diào)劑 +10 | 黨嘉豪 2026-03-31 | 23/1150 |
|
|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +3 | Acesczlo 2026-03-29 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 266分，求材料冶金能源化工等調(diào)劑 +8 | 哇呼哼呼哼 2026-03-27 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 266求調(diào)劑 +3 | 哇呼哼呼哼 2026-03-29 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 282求調(diào)劑 +3 | 呼吸都是減肥 2026-03-31 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 297求調(diào)劑 +17 | 田洪有 2026-03-26 | 18/900 |
|
|
|
[考研] 藥學(xué)105500求調(diào)劑 +3 | Ssun。。 2026-03-28 | 3/150 |
|