 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 3015 | 回復: 16 | ||
nbzhenzhen新蟲 (初入文壇)
|
[求助]
大腸桿菌培養(yǎng) 質(zhì)粒提取后困惑 已有8人參與
|
|
最近老師要求做 實時熒光定量PCR的細菌16S rRNA基因全長的標品。老師說，用質(zhì)�？寺〉姆椒ㄖ苽溥@樣的標品。具體操作如下： 1.JM109 16s RNA基因全長的擴增（27f-1492r) 2.切膠純化回收 3.目的基因與載體（PMD 19-T vector）的連接：10ul，4℃，過夜。 4.將連接有目的基因的載體轉化至感受態(tài)細胞 DH5α：50ul感受態(tài)細胞與10ul以上溶液（第3步的）混合，冰上30min，42℃ 45s，冰上1min，加440ul SOC培養(yǎng)基37℃，180rpm，培養(yǎng)1h。 5.涂布：配制LB培養(yǎng)基，滅菌稍冷卻后，添加1/1000的Amp，倒平板制成固體培養(yǎng)基�；旌�30ul x-gal、7ul IPTG和63ul ddH2O，加至固體平板上，涂布均勻。 取10u l第4步培養(yǎng)液，混合90ul滅菌dd H2O,相當于稀釋10倍后，加至固體平板上，涂布均勻。 6.培養(yǎng)：倒置平板，待平板上的冷凝水晾干后，置于37℃，靜置培養(yǎng)過夜。 7.藍白斑篩選，培養(yǎng)：取出培養(yǎng)基，挑取白斑至3-4ml LB液體培養(yǎng)基（滅菌冷卻后加1/1000Amp）中，37℃，180rpm，幾個小時后，轉移至100ml LB液體培養(yǎng)基中（滅菌冷卻后加1/1000Amp）。37℃，180rpm，16h。 8.質(zhì)粒提�。喝〉�7步培養(yǎng)后的菌液5ml，離心，棄上清。步驟按照TIANGEN質(zhì)粒提取試劑盒。 問題就卡在了質(zhì)粒提取后，出現(xiàn)3個條帶，如圖跑得最快的兩條最亮。問過同實驗室的師兄師姐，他們說未遇到過這種情況，他們提出來的質(zhì)粒都是兩條，一條是不亮的基因組DNA，一條是亮的質(zhì)粒。我不知道我的是怎么回事，質(zhì)粒提取操作重復兩次，仍是一樣的結果。求解。 E.coli 質(zhì)粒的提取.png |
回復此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有212人回復
-
蛋白質(zhì)檢測：精準分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復
» 本主題相關商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 金葡，大腸，乳桿菌
已經(jīng)有3人回復
- 求助~~~~大腸桿菌內(nèi)質(zhì)粒會不會自行發(fā)生同源重組？
已經(jīng)有11人回復
- 大腸桿菌三個質(zhì)粒共轉化問題
已經(jīng)有3人回復
- 求助大腸桿菌發(fā)酵問題
已經(jīng)有15人回復
- 搖的轉化到大腸桿菌的質(zhì)粒有沉淀
已經(jīng)有20人回復
- 目的片段+pPIC9K載體轉化大腸桿菌DH5a后提取質(zhì)粒失敗
已經(jīng)有13人回復
- 克隆提取質(zhì)粒測序結果怎么跟大腸桿菌菌液測序結果序列比對差異很大�。�
已經(jīng)有4人回復
- 質(zhì)粒導入大腸桿菌導不進去，求高手指點
已經(jīng)有16人回復
- 大腸桿菌CaCl2法轉染質(zhì)粒DNA需要注意哪些方面？
已經(jīng)有7人回復
- 本來帶有質(zhì)粒的大腸桿菌再對它進行一次質(zhì)粒轉化能達到增加質(zhì)�？截悢�(shù)的目的嗎？
已經(jīng)有10人回復
- 含AMP時培養(yǎng)大腸桿菌的問題
已經(jīng)有5人回復
- 有木有大腸桿菌單拷貝的表達質(zhì)粒？
已經(jīng)有3人回復
- 誰有用于大腸桿菌基因敲除的pKD46、pCP20等質(zhì)粒
已經(jīng)有7人回復
- 質(zhì)粒導入大腸桿菌
已經(jīng)有9人回復
- 【求助/交流】含質(zhì)粒pSUP202的大腸桿菌S17-1抗生素加多少��？
已經(jīng)有6人回復
- 【求助/交流】大腸桿菌轉化質(zhì)粒，出來的不是我要的了，怎么回事？
已經(jīng)有13人回復
- 【求助/交流】釀酒酵母質(zhì)粒轉化大腸桿菌
已經(jīng)有11人回復
- 【求助/交流】大腸桿菌中的質(zhì)粒最大可以多少kb
已經(jīng)有6人回復
- 請問大腸桿菌培養(yǎng)液里的乳白色沉淀是什么，4度能保存多長時間，質(zhì)粒活性怎么樣？
已經(jīng)有4人回復
lihe131
至尊木蟲 (文壇精英)
- 應助: 106 (高中生)
- 金幣: 12400.9
- 散金: 3690
- 紅花: 10
- 帖子: 14218
- 在線: 263.6小時
- 蟲號: 504554
- 注冊: 2008-02-16
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物物理、生物化學與分子
2樓2014-04-15 15:02:54
Neo2000
木蟲 (著名寫手)
- 應助: 639 (博士)
- 金幣: 8720.2
- 紅花: 37
- 帖子: 1700
- 在線: 269.3小時
- 蟲號: 322365
- 注冊: 2007-03-11
- 專業(yè): 生物物理、生物化學與分子
3樓2014-04-15 17:23:43
4樓2014-04-15 18:42:47
nbzhenzhen
新蟲 (初入文壇)
- 應助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 38.5
- 帖子: 7
- 在線: 5.7小時
- 蟲號: 2612302
- 注冊: 2013-08-23
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學
5樓2014-04-16 09:40:42
6樓2014-04-16 09:47:54
mada1986
木蟲 (小有名氣)
- 應助: 41 (小學生)
- 金幣: 3340.8
- 紅花: 7
- 帖子: 127
- 在線: 57.6小時
- 蟲號: 425672
- 注冊: 2007-07-28
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學
7樓2014-04-16 13:15:18
8樓2014-05-15 10:32:52
9樓2014-05-19 15:12:28
10樓2014-06-12 09:45:45
相關版塊跳轉
我要訂閱樓主 nbzhenzhen 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 【同濟軟件】軟件（085405）考研求調(diào)劑 +3 | 2026eternal 2026-03-18 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 286求調(diào)劑 +6 | lemonzzn 2026-03-16 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 0854可跨調(diào)劑，一作一項核心論文五項專利，省、國級證書40+數(shù)一英一287 +8 | 小李0854 2026-03-16 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 298-一志愿中國農(nóng)業(yè)大學-求調(diào)劑 +7 | 手機用戶 2026-03-17 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿西南交大，求調(diào)劑 +4 | 材化逐夢人 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料專碩274一志愿陜西師范大學求調(diào)劑 +6 | 薛云鵬 2026-03-13 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 301求調(diào)劑 +9 | yy要上岸呀 2026-03-17 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +4 | 是Lupa啊 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料專碩326求調(diào)劑 +6 | 墨煜姒莘 2026-03-15 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +6 | Zz版 2026-03-13 | 6/300 |
|
|
|
[考博] 26申博 +4 | 八旬速覽 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +3 | 曼殊2266 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 中科院材料273求調(diào)劑 +4 | yzydy 2026-03-15 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 277材料科學與工程080500求調(diào)劑 +3 | 自由煎餅果子 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考博] 東華理工大學化材專業(yè)26屆碩士博士申請 +6 | zlingli 2026-03-13 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料與化工 323 英一+數(shù)二+物化，一志愿：哈工大 本人本科雙一流 +4 | 自由的_飛翔 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料與化工（0856）304求B區(qū)調(diào)劑 +6 | 邱gl 2026-03-12 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 329求調(diào)劑 +3 | miaodesi 2026-03-12 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 土木第一志愿276求調(diào)劑，科研和技能十分豐富，求新興方向的導師收留 +3 | 土木小天才 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 070303一志愿西北大學學碩310找調(diào)劑 +3 | d如愿上岸 2026-03-13 | 3/150 |
|