 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 2043 | 回復(fù): 11 | |||
cherry_cao新蟲(chóng) (初入文壇)
|
[求助]
重組質(zhì)粒雙酶切切不出片段 已有2人參與
|
||
|
在構(gòu)建一個(gè)重組質(zhì)粒，載體再加上一個(gè)啟動(dòng)子（259bp），酶切用的是TAKARA 的Q.Cut Hind Ⅲ、PstⅠ，載體上有g(shù)fp基因片段，所以轉(zhuǎn)化子可以表現(xiàn)熒光檢測(cè)。 我挑取了發(fā)熒光的轉(zhuǎn)化子，提質(zhì)粒，酶切，但是沒(méi)有切出來(lái)是怎么回事？  調(diào)過(guò)曝光還是看不見(jiàn)。 電泳圖左→右，Marker 1kb Plus、plasmid、酶切1、酶切2、Marker DL 2000 酶切.png |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有166人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
湖北師范大學(xué)招調(diào)劑啦
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
邵陽(yáng)學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
天津商業(yè)大學(xué) 生物與醫(yī)藥課題組招生
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- Bgl2和Hind3雙酶切切不開(kāi)
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 重組質(zhì)粒雙酶切
已經(jīng)有7人回復(fù)
原海亮
木蟲(chóng) (著名寫手)
- 應(yīng)助: 232 (大學(xué)生)
- 金幣: 4607.4
- 散金: 3521
- 紅花: 33
- 帖子: 1804
- 在線: 375.4小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1392705
- 注冊(cè): 2011-09-06
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-03-12 08:52:27
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-03-12 08:52:27
|
你這是marker加多了還是曝光度沒(méi)有調(diào)好額，條帶都看不清楚，你這個(gè)載體空載的時(shí)候，gfp前面有啟動(dòng)子么？還是是專門檢測(cè)啟動(dòng)子的載體？可以重新做個(gè)酶切降低些質(zhì)粒量，或者再選擇其他的酶試試。另外可以用啟動(dòng)子的特異性引物或者通用引物，用質(zhì)粒做模板做個(gè)PCR驗(yàn)證看看。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
3樓2017-03-11 22:29:27
小冀-
版主 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 713 (博后)
- 貴賓: 3.033
- 金幣: 11446.9
- 散金: 1055
- 紅花: 82
- 帖子: 2509
- 在線: 445.9小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1521695
- 注冊(cè): 2011-12-03
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物信息學(xué)
- 管轄: 微生物
【答案】應(yīng)助回帖
★
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-03-13 07:44:50
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-03-13 07:44:50
|
那可能連的東西和你想要的根本就不是一回事，你可以測(cè)個(gè)序看看，估計(jì)不對(duì) 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
6樓2017-03-11 23:22:14
小冀-
版主 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 713 (博后)
- 貴賓: 3.033
- 金幣: 11446.9
- 散金: 1055
- 紅花: 82
- 帖子: 2509
- 在線: 445.9小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1521695
- 注冊(cè): 2011-12-03
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物信息學(xué)
- 管轄: 微生物
2樓2017-03-11 12:25:06
cherry_cao
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 97
- 散金: 11
- 帖子: 17
- 在線: 4.2小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 5429110
- 注冊(cè): 2017-01-01
|
是曝光度大，為了找小片段； 空載體做了陽(yáng)性對(duì)照并不會(huì)產(chǎn)生GFP，所以應(yīng)該是沒(méi)有自身攜帶啟動(dòng)子； 很尷尬的是啟動(dòng)子前面只有一個(gè)酶切位點(diǎn)Hind3，所以要換兩種酶這個(gè)想法做不了； PCR的結(jié)果是有目的條帶的T^T 我現(xiàn)在只能想是酶切位點(diǎn)變異，先去測(cè)序看看了 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
4樓2017-03-11 23:18:49
cherry_cao
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 97
- 散金: 11
- 帖子: 17
- 在線: 4.2小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 5429110
- 注冊(cè): 2017-01-01
|
連的不對(duì)是指什么？ 嗯，我也猜會(huì)不會(huì)是突變了，但我還做過(guò)單酶切，兩種酶都沒(méi)切出來(lái)，如果突變，會(huì)發(fā)生兩個(gè)酶切位點(diǎn)都變異嗎？ 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
5樓2017-03-11 23:20:35
cherry_cao
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 97
- 散金: 11
- 帖子: 17
- 在線: 4.2小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 5429110
- 注冊(cè): 2017-01-01
|
嗯嗯，是這么打算的，主要是相同條件構(gòu)了兩種不同啟動(dòng)子的質(zhì)粒，一個(gè)正常一個(gè)不知道成什么樣了，讓我很無(wú)奈啊 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
7樓2017-03-11 23:27:30
cherry_cao
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 97
- 散金: 11
- 帖子: 17
- 在線: 4.2小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 5429110
- 注冊(cè): 2017-01-01
|
嗯嗯，是這么打算的，主要是相同條件構(gòu)了兩種不同啟動(dòng)子的質(zhì)粒，一個(gè)正常一個(gè)不知道成什么樣了，讓我很無(wú)奈啊 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
8樓2017-03-11 23:27:57
小冀-
版主 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 713 (博后)
- 貴賓: 3.033
- 金幣: 11446.9
- 散金: 1055
- 紅花: 82
- 帖子: 2509
- 在線: 445.9小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1521695
- 注冊(cè): 2011-12-03
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物信息學(xué)
- 管轄: 微生物
9樓2017-03-11 23:29:38
10樓2017-03-13 00:53:26
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 cherry_cao 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 280求調(diào)劑 +6 | 咕嚕曉曉 2026-04-02 | 6/300 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 求調(diào)劑22408 288分 +3 | new382 2026-04-02 | 3/150 |
|
|
[考研] 找調(diào)劑 +6 | 楚喬喬 2026-04-01 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料科學(xué)與工程調(diào)劑 +18 | 深V宿舍吧 2026-03-30 | 19/950 |
|
|
|
[考研] 07生物學(xué)求調(diào)劑 一志愿同濟(jì)大學(xué)359分 +3 | LAMC. 2026-03-30 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 266求調(diào)劑 +4 | 學(xué)員97LZgn 2026-04-02 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 各位老師好，我的一志愿為北京科技大學(xué)085601材料專碩 +13 | Koxui 2026-03-28 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 一志愿上海海洋大學(xué)083200食品學(xué)碩，求調(diào)劑，接受其他專業(yè) +5 | what張 2026-04-01 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 266分求材料化工冶金礦業(yè)等專業(yè)的調(diào)劑 +7 | 哇呼哼呼哼 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 350求調(diào)劑 +7 | 阿佳～ 2026-03-31 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 262求調(diào)劑 +9 | 勵(lì)志一定發(fā)文章 2026-03-31 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 070300求調(diào)劑306分 +5 | 26要上岸 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿 南京航空航天大學(xué) ，080500材料科學(xué)與工程學(xué)碩 +10 | @taotao 2026-03-31 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑申請(qǐng) +8 | 張張張張zy 2026-03-31 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 313求調(diào)劑 +6 | 賣個(gè)關(guān)子吧 2026-03-31 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 吉大生物學(xué)326分求調(diào)劑 +3 | sunnyupup 2026-03-31 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085600，材料與化工321分求調(diào)劑 +10 | 大饞小子 2026-03-28 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 305求調(diào)劑 +8 | RuiFairyrui 2026-03-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +7 | 爭(zhēng)取九點(diǎn)睡 2026-03-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 081200-11408-276學(xué)碩求調(diào)劑 +4 | 崔wj 2026-03-26 | 4/200 |
|