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腺相關病毒（rAAV6）感染星形膠質(zhì)細胞的體內(nèi)外研究 已有1人參與
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 腺相關病毒載體是越來越受歡迎的載體工具，它可將基因輸送到中樞神經(jīng)系統(tǒng)，具有非致病性、免疫原性低、可感染分裂細胞和非分裂細胞的特點。它的一個局限性是對神經(jīng)類細胞的感染有取向性，神經(jīng)膠質(zhì)細胞特別是星形膠質(zhì)細胞的感染效率很低。為了克服這個局限，先前的研究中利用星形膠質(zhì)細胞的特異性的啟動子來構建載體包裝病毒，以及用不同血清型的病毒來感染星形膠質(zhì)細胞，但是各種研究中的感染效率并不一致。在本實驗中，我們測試了7種商業(yè)化的腺相關病毒的血清型，血清型1、2、5、6、7、8、9（腺相關病毒由維真生物提供），通過觀察綠色熒光蛋白（GFP）的表達來測試各種血清型病毒感染星形膠質(zhì)細胞的能力。在細胞培養(yǎng)中，rAAV6表現(xiàn)出穩(wěn)定的高效的感染效率，而rAAV2只有一些批次的病毒對星形膠質(zhì)細胞有感染性。為了證明我們所用的病毒活性沒有問題，我們將所用病毒感染公認的易感染細胞ARPE-19細胞并都表現(xiàn)出很高的感染性�；隗w外實驗結果，我們選用rAAV6和rAAV2進行了體內(nèi)實驗，同樣條件下感染星形膠質(zhì)細胞和神經(jīng)元細胞，感染3個星期后，對病毒表達蛋白GFP、神經(jīng)元細胞特異性標志蛋白NeuN以及星形膠質(zhì)細胞特異性標志蛋白GFAP進行免疫染色，我們發(fā)現(xiàn)rAAV6對星形膠質(zhì)細胞有很高的感染率（90%以上細胞被感染），但是對神經(jīng)元細胞的感染率很低（約10%感染率），相反地，rAAV2對神經(jīng)元細胞有高感染率（約65%），但是不易感染星形膠質(zhì)細胞（約20%）�？傊�，我們的研究表明rAAV6能夠被用作對體內(nèi)星形膠質(zhì)細胞進行基因表達調(diào)控（過表達或敲低）的工具。 |
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2樓2017-04-05 16:57:41
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3樓2017-04-25 13:31:40
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