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腺相關(guān)病毒（rAAV6）感染星形膠質(zhì)細(xì)胞的體內(nèi)外研究 已有1人參與
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 腺相關(guān)病毒載體是越來(lái)越受歡迎的載體工具，它可將基因輸送到中樞神經(jīng)系統(tǒng)，具有非致病性、免疫原性低、可感染分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞的特點(diǎn)。它的一個(gè)局限性是對(duì)神經(jīng)類細(xì)胞的感染有取向性，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞特別是星形膠質(zhì)細(xì)胞的感染效率很低。為了克服這個(gè)局限，先前的研究中利用星形膠質(zhì)細(xì)胞的特異性的啟動(dòng)子來(lái)構(gòu)建載體包裝病毒，以及用不同血清型的病毒來(lái)感染星形膠質(zhì)細(xì)胞，但是各種研究中的感染效率并不一致。在本實(shí)驗(yàn)中，我們測(cè)試了7種商業(yè)化的腺相關(guān)病毒的血清型，血清型1、2、5、6、7、8、9（腺相關(guān)病毒由維真生物提供），通過(guò)觀察綠色熒光蛋白（GFP）的表達(dá)來(lái)測(cè)試各種血清型病毒感染星形膠質(zhì)細(xì)胞的能力。在細(xì)胞培養(yǎng)中，rAAV6表現(xiàn)出穩(wěn)定的高效的感染效率，而rAAV2只有一些批次的病毒對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞有感染性。為了證明我們所用的病毒活性沒(méi)有問(wèn)題，我們將所用病毒感染公認(rèn)的易感染細(xì)胞ARPE-19細(xì)胞并都表現(xiàn)出很高的感染性�；隗w外實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們選用rAAV6和rAAV2進(jìn)行了體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，同樣條件下感染星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元細(xì)胞，感染3個(gè)星期后，對(duì)病毒表達(dá)蛋白GFP、神經(jīng)元細(xì)胞特異性標(biāo)志蛋白NeuN以及星形膠質(zhì)細(xì)胞特異性標(biāo)志蛋白GFAP進(jìn)行免疫染色，我們發(fā)現(xiàn)rAAV6對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞有很高的感染率（90%以上細(xì)胞被感染），但是對(duì)神經(jīng)元細(xì)胞的感染率很低（約10%感染率），相反地，rAAV2對(duì)神經(jīng)元細(xì)胞有高感染率（約65%），但是不易感染星形膠質(zhì)細(xì)胞（約20%）�？傊�，我們的研究表明rAAV6能夠被用作對(duì)體內(nèi)星形膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行基因表達(dá)調(diào)控（過(guò)表達(dá)或敲低）的工具。 |
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2樓2017-04-05 16:57:41
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3樓2017-04-25 13:31:40
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