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腺相關(guān)病毒(rAAV6)感染星形膠質(zhì)細(xì)胞的體內(nèi)外研究 已有1人參與
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![]() ![]() 腺相關(guān)病毒載體是越來越受歡迎的載體工具,它可將基因輸送到中樞神經(jīng)系統(tǒng),具有非致病性、免疫原性低、可感染分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞的特點。它的一個局限性是對神經(jīng)類細(xì)胞的感染有取向性,神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞特別是星形膠質(zhì)細(xì)胞的感染效率很低。為了克服這個局限,先前的研究中利用星形膠質(zhì)細(xì)胞的特異性的啟動子來構(gòu)建載體包裝病毒,以及用不同血清型的病毒來感染星形膠質(zhì)細(xì)胞,但是各種研究中的感染效率并不一致。在本實驗中,我們測試了7種商業(yè)化的腺相關(guān)病毒的血清型,血清型1、2、5、6、7、8、9(腺相關(guān)病毒由維真生物提供),通過觀察綠色熒光蛋白(GFP)的表達(dá)來測試各種血清型病毒感染星形膠質(zhì)細(xì)胞的能力。在細(xì)胞培養(yǎng)中,rAAV6表現(xiàn)出穩(wěn)定的高效的感染效率,而rAAV2只有一些批次的病毒對星形膠質(zhì)細(xì)胞有感染性。為了證明我們所用的病毒活性沒有問題,我們將所用病毒感染公認(rèn)的易感染細(xì)胞ARPE-19細(xì)胞并都表現(xiàn)出很高的感染性。基于體外實驗結(jié)果,我們選用rAAV6和rAAV2進(jìn)行了體內(nèi)實驗,同樣條件下感染星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元細(xì)胞,感染3個星期后,對病毒表達(dá)蛋白GFP、神經(jīng)元細(xì)胞特異性標(biāo)志蛋白NeuN以及星形膠質(zhì)細(xì)胞特異性標(biāo)志蛋白GFAP進(jìn)行免疫染色,我們發(fā)現(xiàn)rAAV6對星形膠質(zhì)細(xì)胞有很高的感染率(90%以上細(xì)胞被感染),但是對神經(jīng)元細(xì)胞的感染率很低(約10%感染率),相反地,rAAV2對神經(jīng)元細(xì)胞有高感染率(約65%),但是不易感染星形膠質(zhì)細(xì)胞(約20%)?傊覀兊难芯勘砻鱮AAV6能夠被用作對體內(nèi)星形膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行基因表達(dá)調(diào)控(過表達(dá)或敲低)的工具。 ![]() ![]() |
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