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15978432804新蟲 (小有名氣)
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如何合理的設(shè)計(jì)引物 已有1人參與
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我剛開始做實(shí)驗(yàn)就遇到了很頭疼的事，我做的是同源克隆，現(xiàn)在要擴(kuò)一個(gè)基因的CDS區(qū)的全長(zhǎng)，但是在設(shè)計(jì)引物時(shí)走不下去了。那個(gè)CDS區(qū)有2000bp左右，設(shè)計(jì)出來的引物得分都很低(我用的是oligo7)，整體上引物不是太好，我就先試試看能不能擴(kuò)出來，但試了好長(zhǎng)時(shí)間都沒結(jié)果，TM梯度都試了，原料都沒問題，換個(gè)別的基因引物就有結(jié)果，在相關(guān)時(shí)間內(nèi)也表達(dá)。也不知道該怎么辦了，我設(shè)計(jì)引物的技術(shù)不行，一樣能幫幫我，給予指點(diǎn)��！ @biostar2009 @飛約瘋?cè)嗽?/u> @wizardfan @youlinglyw 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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15978432804: 金幣+2, ★有幫助 2017-03-31 23:34:12
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| 以我的經(jīng)驗(yàn)，做巢式PCR，估計(jì)你這個(gè)基因附近的序列不適合做引物，可以多選上下游1000bp，設(shè)計(jì)外巢引物，換P長(zhǎng)片段的酶，比如LA taq，Primer star這種，內(nèi)巢引物用你現(xiàn)在設(shè)計(jì)的這個(gè)就行了。我之前也是P一個(gè)3k多的片段P不出來，試了上面人說的方法都沒用，最后巢式P出來的。 |
13樓2017-03-31 09:45:28
3樓2017-03-30 09:07:53
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