 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 4 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2765 | 回復: 3 | ||
houchenxi金蟲 (初入文壇)
|
[求助]
pcr電泳條帶彌散
|
|
想要p出一個4kb的目的基因，一直p不出來，請大神幫幫忙 我用的cDNA是從RPE細胞內(nèi)提取出來的，用的聚合酶是方塔高保真酶 體系如下（單位：微升）： 滅菌miniQ：2.8 模板cDNA：2 5*enhancer：2 5*SFbuffer：2 引物1: 0.4 引物2： 0.4 dNTPmix：0.2 方塔高保真酶：0.2 其中引物都稀釋到10vm， 溫度設(shè)置： 預變性 95度 2min 變性 95度 10s 退火 50~69 都試過 20s 延伸 72度 2min 徹底延伸 72度 10min 中間三個步驟30個cycle 跑膠結(jié)果是彌散的（圖一）： 為了證明我的體系是沒錯的，我用師兄的引物，其他都用我自己的做了一次，發(fā)現(xiàn)是能夠p出來的（圖二） 之后為了證明引物沒有降解，我使用瓊脂糖凝膠電泳（1%，加4微升EB），引物：10*loading buffer：dd水=2:1:7.跑了10分鐘，marker右邊兩個是現(xiàn)在在用的引物（圖三）。 引物已經(jīng)重新設(shè)計過一遍了，連接片段和文獻上的相同， 其實剛開始還是有非特異性條帶的（圖四），現(xiàn)在連非特異性的都沒了，實在不知道為什么  請大神們指教 圖一.jpg 圖二.jpg 圖三.jpg 圖四.jpg |
回復此樓» 猜你喜歡
307求調(diào)劑
已經(jīng)有9人回復
-
288求調(diào)劑
已經(jīng)有15人回復
-
085700資源與環(huán)境308求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復
-
294求調(diào)劑材料與化工專碩
已經(jīng)有14人回復
-
0817 化學工程 299分求調(diào)劑 有科研經(jīng)歷 有二區(qū)文章
已經(jīng)有18人回復
-
265求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復
-
296求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復
-
0703化學調(diào)劑
已經(jīng)有13人回復
-
085600材料與化工 求調(diào)劑
已經(jīng)有15人回復
-
生物學調(diào)劑招人�。�！
已經(jīng)有4人回復
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- PCR電泳圖
已經(jīng)有7人回復
- pcr條帶彌散
已經(jīng)有4人回復
- PCR電泳條帶為什么會這樣？（附圖）
已經(jīng)有10人回復
- RNA 經(jīng)過DNaseI 消化后條帶都彌散 不消化 直接反轉(zhuǎn)錄 PCR有條帶 不確定是不是cDNA
已經(jīng)有1人回復
- 【求助/交流】RT-PCR電泳呈現(xiàn)彌散狀
已經(jīng)有5人回復
- 酶切后電泳條帶發(fā)生了彌散
已經(jīng)有6人回復
- ＰＣＲ產(chǎn)物電泳時出現(xiàn)彌散現(xiàn)象
已經(jīng)有0人回復
- 昆蟲基因PCR后電泳條帶淡，急求幫助？？？？
已經(jīng)有4人回復
- PCR產(chǎn)物電泳，條帶彌散的原因
已經(jīng)有16人回復
- 大家?guī)臀铱纯次易罱龅膒cr電泳圖
已經(jīng)有4人回復
- 瓊脂糖凝膠電泳的條帶問題
已經(jīng)有2人回復
- 老師也解答不了的未知電泳條帶太神奇了 只能求高人解答~~~~~
已經(jīng)有4人回復
- DNA提取測序，DNA提取后，電泳條帶彌散拖尾
已經(jīng)有7人回復
- CBF1基因擴增出的電泳條帶為什么不是一條帶？
已經(jīng)有8人回復
- 3‘RACE inner PCR 電泳結(jié)果總是有彌散現(xiàn)象回收條帶不成帶狀什么原因啊？
已經(jīng)有17人回復
- 流感病毒RT-PCR，電泳老是跑不出條帶~~~糾結(jié)！
已經(jīng)有5人回復
- 【求助/交流】PCR產(chǎn)物電泳條帶彌散？？？
已經(jīng)有30人回復
- 電泳條帶很粗---怎么回事？
已經(jīng)有2人回復
2樓2017-03-30 23:26:37
houchenxi
金蟲 (初入文壇)
- 應助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 806.9
- 帖子: 31
- 在線: 18.3小時
- 蟲號: 3465823
- 注冊: 2014-10-10
- 性別: GG
- 專業(yè): 細胞增殖、生長與分化
3樓2017-03-31 09:20:48
houchenxi
金蟲 (初入文壇)
- 應助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 806.9
- 帖子: 31
- 在線: 18.3小時
- 蟲號: 3465823
- 注冊: 2014-10-10
- 性別: GG
- 專業(yè): 細胞增殖、生長與分化
4樓2017-04-07 10:49:11
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 houchenxi 的主題更新
| 4 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 294求調(diào)劑材料與化工專碩 +14 | 陌の森林 2026-03-18 | 14/700 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿武漢理工材料工程專碩調(diào)劑 +5 | Doleres 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿北京化工大學0703化學318分，有科研經(jīng)歷，求調(diào)劑 +3 | 一瓶苯甲酸 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 266求調(diào)劑 +5 | 陽陽哇塞 2026-03-14 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 一志愿天津大學化學工藝專業(yè)（081702）315分求調(diào)劑 +11 | yangfz 2026-03-17 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +3 | 曼殊2266 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿985，本科211，0817化學工程與技術(shù)319求調(diào)劑 +10 | Liwangman 2026-03-15 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工 +5 | 安全上岸！ 2026-03-16 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 303求調(diào)劑 +4 | 睿08 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0703化學求調(diào)劑 總分331 +3 | ZY-05 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 工科材料085601 279求調(diào)劑 +6 | 困于星晨 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[考博] 26申博 +4 | 八6八68 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 302求調(diào)劑 +4 | 小賈同學123 2026-03-15 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 278求調(diào)劑 +3 | Yy7400 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿，福州大學材料專碩339分求調(diào)劑 +3 | 木子momo青爭 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +5 | 素年祭語 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 070305求調(diào)劑 +3 | mlpqaz03 2026-03-14 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 中科大材料專碩319求調(diào)劑 +3 | 孟鑫材料 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 328求調(diào)劑 +3 | 5201314Lsy！ 2026-03-13 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +3 | 冬十三 2026-03-13 | 3/150 |
|