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勝哥的歌新蟲 (初入文壇)
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[求助]
在構(gòu)建RNA干擾載體中，目的片段與PLKO.1的連接問題 已有1人參與
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新人求教 1、在合成我的干擾片段后（上海生工合成），發(fā)現(xiàn)目的片段的5`端是沒有磷酸化的，而是羥基。因為在DNA連接時要形成3`-5`磷酸二酯鍵，這樣目的片段和我的載體不是沒有辦法連接了？看了所有教程，都沒有談到5`端需要磷酸化，是不是默認(rèn)合成的5端都沒有磷酸化？ 2、關(guān)于1的問題，我想到在單酶切載體，為了防止自身環(huán)化而用堿性磷酸酶把載體的5`端磷酸集團(tuán)轉(zhuǎn)為羥基，那目的片段再連接的時候是怎么連上的？ |
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2樓2017-07-27 14:18:14
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勝哥的歌4樓2017-07-28 10:20:00
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5樓2017-07-28 10:27:27
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