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勝哥的歌新蟲 (初入文壇)
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[求助]
在構建RNA干擾載體中,目的片段與PLKO.1的連接問題 已有1人參與
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新人求教 1、在合成我的干擾片段后(上海生工合成),發(fā)現目的片段的5`端是沒有磷酸化的,而是羥基。因為在DNA連接時要形成3`-5`磷酸二酯鍵,這樣目的片段和我的載體不是沒有辦法連接了?看了所有教程,都沒有談到5`端需要磷酸化,是不是默認合成的5端都沒有磷酸化? 2、關于1的問題,我想到在單酶切載體,為了防止自身環(huán)化而用堿性磷酸酶把載體的5`端磷酸集團轉為羥基,那目的片段再連接的時候是怎么連上的? |
新蟲 (初入文壇)
榮譽版主 (知名作家)
廣庭之惘然
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新蟲 (初入文壇)
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