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yandalan新蟲(chóng) (初入文壇)
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關(guān)于Western blot背景太臟的問(wèn)題 已有7人參與
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組織蛋白，總上樣量為40ug，用10%的膠，60v電泳濃縮膠，80v電泳分離膠，200mA轉(zhuǎn)膜2小時(shí)，之后5%脫脂奶粉封閉2小時(shí)，一抗以一抗稀釋液1：1000稀釋，因?yàn)闆](méi)有4℃冰柜，以前都是一抗在垂直混懸儀孵育過(guò)夜，第二天以1XTBST洗條帶5min6次，二抗1：2000孵育2小時(shí)，1XTBST洗帶條5min6次后用高敏曝光劑曝光，如下圖，之后改變了很多次條件，包括一抗敷育時(shí)間減少到常溫4小時(shí)，稀釋一抗至1：10000，二抗稀釋至1：10000等，結(jié)果都是一樣，求助！萬(wàn)分感謝！ 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
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jurkat.1640
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2樓2017-08-02 10:41:24
knighthan112
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3樓2017-08-04 17:17:52
4樓2017-08-04 21:11:39
xiao2189818
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給你個(gè)建議 37度溫箱2h 盡量讓一抗覆蓋住pvdf膜 然后 拿出來(lái)洗脫3次 弄2抗2h 完了后泡到tbst中 第二天拿出來(lái)曝光就行 其實(shí)我做了好久 感覺(jué)做完直接曝光最好 你這個(gè)洗脫不要少 能保存到4度是最好的 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
5樓2017-08-04 22:26:43
xiao2189818
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你沒(méi)發(fā)現(xiàn)你的背景有問(wèn)題嗎 還有一點(diǎn)你的目的蛋白多大 你用的多大孔的膜 一抗 二抗是不同屬的嗎 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
6樓2017-08-04 22:27:46
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縮短1抗時(shí)間，更改封閉液組份并延長(zhǎng)時(shí)間，縮短二抗時(shí)間，加大稀釋比例，幾步漂洗液更換一下，更改一下離子濃度，，western 就是一個(gè)摸索的過(guò)程，不要急 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
7樓2017-08-05 09:31:07
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8樓2017-08-05 18:13:47
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9樓2017-08-05 18:39:58
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