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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 核酸雜交 » 求助southern實驗
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[求助]
求助southern實驗 已有1人參與
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親們誰做過southern實驗，我最近做了一個月了，但是一直雜不出條帶來，郁悶，求大神指點，萬分感謝 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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【答案】應助回帖
感謝參與，應助指數 +1
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1.可以增加上樣量 2.一抗可以4°冰箱過夜，如果抗體效價不高可以增大一抗?jié)舛然蛘哐娱L一抗孵育時間 3.洗一抗時，不要過于激烈，可以TBST洗5次，每次5min 4.二抗?jié)舛冗m當，室溫孵育1h即可（確定二抗沒問題，可以做個平行實驗，或者實驗室其他人用一下，看是否工作） 5.洗二抗同洗一抗 6.我一般是選擇ELC顯影，沒用過堿性磷酸酶顯色法，所以沒有有用的意見提供~~ 封閉是用封閉液將PVDF膜沒有結合蛋白的地方封閉上，減少背景，所以搖動要緩慢，提供充足的接觸，也可以不要動，或者封閉過夜都可以。洗膜時搖動劇烈可能會將一抗洗掉，所以不要過于激烈。 祝實驗順利~~ |
2樓2017-08-05 22:02:04
首先非常感謝您在百忙中指點我，很感激，我想說我上了15ug基因組，我用的是羅氏的地高辛標記的試劑盒，一直雜不出來，陽性對照可以雜到條帶，但是實驗組雜不出來。酶切以后我也跑膠了基因組切開了呈彌散的條帶，為什么總是雜不出來，求指點 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2017-08-05 22:49:33
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