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kk123321新蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助southern實(shí)驗(yàn) 已有1人參與
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親們誰做過southern實(shí)驗(yàn)，我最近做了一個(gè)月了，但是一直雜不出條帶來，郁悶，求大神指點(diǎn)，萬分感謝 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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kk123321
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 14.6
- 帖子: 3
- 在線: 2.2小時(shí)
- 蟲號(hào): 7028649
- 注冊(cè): 2017-08-05
- 專業(yè): 微生物學(xué)
首先非常感謝您在百忙中指點(diǎn)我，很感激，我想說我上了15ug基因組，我用的是羅氏的地高辛標(biāo)記的試劑盒，一直雜不出來，陽性對(duì)照可以雜到條帶，但是實(shí)驗(yàn)組雜不出來。酶切以后我也跑膠了基因組切開了呈彌散的條帶，為什么總是雜不出來，求指點(diǎn) 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2017-08-05 22:49:33
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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1.可以增加上樣量 2.一抗可以4°冰箱過夜，如果抗體效價(jià)不高可以增大一抗?jié)舛然蛘哐娱L一抗孵育時(shí)間 3.洗一抗時(shí)，不要過于激烈，可以TBST洗5次，每次5min 4.二抗?jié)舛冗m當(dāng)，室溫孵育1h即可（確定二抗沒問題，可以做個(gè)平行實(shí)驗(yàn)，或者實(shí)驗(yàn)室其他人用一下，看是否工作） 5.洗二抗同洗一抗 6.我一般是選擇ELC顯影，沒用過堿性磷酸酶顯色法，所以沒有有用的意見提供~~ 封閉是用封閉液將PVDF膜沒有結(jié)合蛋白的地方封閉上，減少背景，所以搖動(dòng)要緩慢，提供充足的接觸，也可以不要?jiǎng)樱蛘叻忾]過夜都可以。洗膜時(shí)搖動(dòng)劇烈可能會(huì)將一抗洗掉，所以不要過于激烈。 祝實(shí)驗(yàn)順利~~ |
2樓2017-08-05 22:02:04
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