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求助southern實驗 已有1人參與
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親們誰做過southern實驗,我最近做了一個月了,但是一直雜不出條帶來,郁悶,求大神指點,萬分感謝 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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1.可以增加上樣量 2.一抗可以4°冰箱過夜,如果抗體效價不高可以增大一抗?jié)舛然蛘哐娱L一抗孵育時間 3.洗一抗時,不要過于激烈,可以TBST洗5次,每次5min 4.二抗?jié)舛冗m當,室溫孵育1h即可(確定二抗沒問題,可以做個平行實驗,或者實驗室其他人用一下,看是否工作) 5.洗二抗同洗一抗 6.我一般是選擇ELC顯影,沒用過堿性磷酸酶顯色法,所以沒有有用的意見提供~~ 封閉是用封閉液將PVDF膜沒有結(jié)合蛋白的地方封閉上,減少背景,所以搖動要緩慢,提供充足的接觸,也可以不要動,或者封閉過夜都可以。洗膜時搖動劇烈可能會將一抗洗掉,所以不要過于激烈。 祝實驗順利~~ |

首先非常感謝您在百忙中指點我,很感激,我想說我上了15ug基因組,我用的是羅氏的地高辛標記的試劑盒,一直雜不出來,陽性對照可以雜到條帶,但是實驗組雜不出來。酶切以后我也跑膠了基因組切開了呈彌散的條帶,為什么總是雜不出來,求指點![]() 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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