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1樓 2009-10-17 20:25:18

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gyesang

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1、你想怎么個(gè)克隆法，先把基因克隆到T載體上呢，還是直接切PCR產(chǎn)物，裝到pET載體上？如果先克隆到T載體上你就用不著加保護(hù)堿基，如果想直接酶切PCR產(chǎn)物，然后裝pET載體，就要加保護(hù)堿基了，至少3個(gè)，一般為3個(gè)
2、 pET有pET28和pET32系列，每種又有abc(+)-之分，要根據(jù)你所用的是哪一個(gè)載體，才有可能考慮是否對(duì)讀碼框的問題，也就是蛋白在翻譯的時(shí)候跟標(biāo)簽是in-frame-translation的，你把問題補(bǔ)充完整再幫你看啊

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3樓2009-10-17 20:41:43

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zhuifeng7000

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你一定要在上游加個(gè)Nco1嗎？Nco1中有個(gè)ATG起始密碼子，很可能會(huì)使的閱讀框錯(cuò)讀，影響你的表達(dá)。

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2樓2009-10-17 20:40:50

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4樓2009-10-17 21:04:12

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引用回帖:

Originally posted by mengfei8336 at 2009-10-17 21:04:
那我換個(gè)說法，CC ATG G CA TGA ATGACAATTAAAGAAAC……，這段序列加到pET載體上，翻譯從第一個(gè)ATG開始，在其后第二個(gè)密碼子是終止密碼子。在表達(dá)時(shí)，能不能得到我想要的蛋白（ATGACAATTAAAGAAAC……翻譯的產(chǎn)物）？

完全可以的。

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5樓2009-10-18 00:01:00

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