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無學(xué)論hh新蟲 (初入文壇)
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[求助]
純化，異源表達(dá) 已有1人參與
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我是做酶的，我在異源表達(dá)好后，培養(yǎng)破碎得到粗酶液，檢測(cè)有活性，但是在做鎳柱純化時(shí)，感覺蛋白不掛柱子，我是在蛋白質(zhì)雙端都加上了6xhis標(biāo)簽，求大神們，幫忙解答一下，該怎么做。 @天使托 發(fā)自小木蟲手機(jī)客戶端 |
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無學(xué)論hh
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蛋白膠我正在做，等出來再看看結(jié)果，其實(shí)有人推薦我用MBP大標(biāo)簽，但是這個(gè)標(biāo)簽可能會(huì)影響酶的空間結(jié)構(gòu)進(jìn)而影響酶活，最主要的是這個(gè)表簽需要切除，酶切反應(yīng)要過夜，所以無法第一時(shí)間進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，一直在考慮要不要用，想問一下大家還有沒有什么好的方法。  發(fā)自小木蟲手機(jī)客戶端 |
4樓2026-01-20 16:26:54
隱約
鐵蟲 (正式寫手)
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2樓2026-01-20 13:57:09
無學(xué)論hh
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謝謝，這個(gè)是可溶性蛋白，我每次都是破碎得到粗酶液，然后12000rpm離心20min后去檢測(cè)上清液的酶活的，有酶活后再去做的純化，純化時(shí)反復(fù)用粗酶液過柱子3-4遍，然后先用40mM的咪唑溶液洗去雜蛋白，100-500mM咪唑溶液探究目的蛋白洗脫濃度，用蛋白質(zhì)定量試劑G250實(shí)時(shí)檢測(cè)洗脫液中蛋白濃度，但是做了幾次都是40mM就洗出來了大部分蛋白，然后100mM洗出一點(diǎn)，200-500逐漸減少了，每個(gè)濃度洗脫液都用了四杯柱，用底物檢測(cè)酶活時(shí)，過柱子剩下的粗酶液中酶活最高，40mM咪唑溶液中酶活較高，100-500與前者比斷檔級(jí)降低。 發(fā)自小木蟲手機(jī)客戶端 |
3樓2026-01-20 16:23:00
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