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bernadat金蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助】想知道指紋圖譜跟高效液相色譜的最根本區(qū)別 已有7人參與
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| 要做指紋圖譜了,看來(lái)看去沒(méi)發(fā)現(xiàn)高效液相色譜跟指紋圖譜有什么根本區(qū)別,用的檢測(cè)器可以是一樣,只不過(guò)指紋圖譜跑的時(shí)間都很長(zhǎng),都采用了梯度洗脫,盡量要保證所有成分都出來(lái),難道這就是兩者的區(qū)別???很想知道答案,望過(guò)客不吝賜教 |
木蟲 (正式寫手)
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誠(chéng)如2樓所說(shuō),指紋圖譜有很多種,如果樓主做的是HPLC指紋圖譜,那么HPLC指紋圖譜用的譜圖就是HPLC的譜圖,但是指紋圖譜跟常規(guī)用HPLC檢測(cè)幾個(gè)目標(biāo)物是有區(qū)別的。 常規(guī)用HPLC做目標(biāo)物檢測(cè),只要目標(biāo)物能夠獲得足夠的分離度,峰形漂亮,峰面積足夠就基本搞定了。但是如果做指紋圖譜,不僅要用梯度洗脫、延長(zhǎng)洗脫時(shí)間等手段保證里面的物質(zhì)盡量洗脫出來(lái),而且要保證出來(lái)的各個(gè)峰的峰面積差異不能過(guò)大,否則在后續(xù)做圖譜相似度匹配時(shí),大峰占據(jù)的比重過(guò)大,對(duì)整個(gè)樣品間相似度評(píng)價(jià)的貢獻(xiàn)過(guò)大,這樣的指紋圖譜就不完美了,不具用該指紋圖譜來(lái)定性該藥物的專屬性,因此如果用的是紫外檢測(cè)器或者是DAD檢測(cè)器時(shí),除了優(yōu)化洗脫外,對(duì)檢測(cè)器條件的優(yōu)化也是非常重要的,具體優(yōu)化過(guò)程可能比目標(biāo)物檢測(cè)要復(fù)雜得多。 從指紋圖譜的概念出發(fā),你的圖譜要保證穩(wěn)定性、模糊性和專屬性。 穩(wěn)定性即同一批藥材出來(lái)的指紋圖譜要能完美重復(fù),相似度匹配率要高。 模糊性即不能只著眼優(yōu)化單個(gè)峰,不能用這少數(shù)兩三個(gè)峰來(lái)代表該藥材,而是用整張圖譜來(lái)代表該藥材。在保證整個(gè)圖譜的整體分離度基礎(chǔ)上可以犧牲部分個(gè)別峰的分離度。從信息論的觀點(diǎn)看,如果整張圖譜所有峰的分離度總和最大,可以代表著該圖譜含有最大化的化學(xué)信息,這就足夠。 專屬性就是這張圖譜要有跟其他藥物的圖譜區(qū)別俄地方,不能兩個(gè)藥物做出的圖譜的相似度很高,那么這個(gè)指紋圖譜就代表不了任何藥物了。該藥物的指紋圖譜要具有該藥物區(qū)別于其他藥物的特征,不一定是分離出越多的物質(zhì)就越好,如果專屬性足夠,犧牲個(gè)別峰的分離度,使分離檢測(cè)條件相對(duì)簡(jiǎn)化,分析時(shí)間相對(duì)減少也是可行的,而且簡(jiǎn)化的條件還能提高圖譜的重現(xiàn)性。 |
金蟲 (著名寫手)

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