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【求助/交流】鮭魚(yú)精DNA怎么處理啊 已有1人參與
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我最近想用氯化鋰的方法做轉(zhuǎn)化酵母，但是不知道鮭魚(yú)精DNA要怎么處理，看到網(wǎng)頁(yè)上有一種處理方法，也不是很明白，想請(qǐng)教你一下。 鮭魚(yú)精DNA 說(shuō)明：生化研究。 CAS＃：9007-49-2 外觀：白色線狀 特性：Linkage：Formerly listed as Type III 溶解性：溶于水，參考濃度2mg/ml 儲(chǔ)存條件：2-8℃ From Sigma D1626 Salmon DNA 的配制： 組份濃度10 mg/ml Salmon DNA ;配制量約100 ml 配制方法: 1. 稱取鮭魚(yú)精DNA 2 g置于500 ml燒杯中，加入約200 ml的TE Buffer。 2. 用磁力攪拌器室溫?cái)嚢?～4小時(shí)，溶解后加入4 ml的5 M NaCl， 使其終濃度為0.1 M。 3. 用苯酚和苯酚/氯仿各抽提1次。4. 回收水相溶液后，使用17號(hào)皮下注射針頭快速吸打溶液約20 次，以切斷DNA。 5. 加入2倍體積的預(yù)冷乙醇進(jìn)行乙醇沉淀。 6. 離心回收DNA后，溶解于100 ml的去離子水中，測(cè)定溶液的OD260值。 7. 計(jì)算溶液的DNA濃度后，稀釋DNA溶液至10 mg/ml。 8. 煮沸10分鐘后，分裝成小份(1 ml/份)。-20℃保存。 9. 使用前在沸水浴中加熱5分鐘后，迅速冰浴冷卻。 第3步中苯酚和氯仿的用量是多少啊，我查了很久，都沒(méi)找到。 還有第五步中的乙醇用的是無(wú)水乙醇嗎？ 請(qǐng)做過(guò)這個(gè)實(shí)驗(yàn)的大俠指點(diǎn)一下。 |
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