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【求助/交流】鮭魚精DNA怎么處理啊 已有1人參與
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我最近想用氯化鋰的方法做轉(zhuǎn)化酵母,但是不知道鮭魚精DNA要怎么處理,看到網(wǎng)頁上有一種處理方法,也不是很明白,想請教你一下。 鮭魚精DNA 說明:生化研究。 CAS#:9007-49-2 外觀:白色線狀 特性:Linkage:Formerly listed as Type III 溶解性:溶于水,參考濃度2mg/ml 儲存條件:2-8℃ From Sigma D1626 Salmon DNA 的配制: 組份濃度10 mg/ml Salmon DNA ;配制量約100 ml 配制方法: 1. 稱取鮭魚精DNA 2 g置于500 ml燒杯中,加入約200 ml的TE Buffer。 2. 用磁力攪拌器室溫攪拌2~4小時,溶解后加入4 ml的5 M NaCl, 使其終濃度為0.1 M。 3. 用苯酚和苯酚/氯仿各抽提1次。4. 回收水相溶液后,使用17號皮下注射針頭快速吸打溶液約20 次,以切斷DNA。 5. 加入2倍體積的預冷乙醇進行乙醇沉淀。 6. 離心回收DNA后,溶解于100 ml的去離子水中,測定溶液的OD260值。 7. 計算溶液的DNA濃度后,稀釋DNA溶液至10 mg/ml。 8. 煮沸10分鐘后,分裝成小份(1 ml/份)。-20℃保存。 9. 使用前在沸水浴中加熱5分鐘后,迅速冰浴冷卻。 第3步中苯酚和氯仿的用量是多少啊,我查了很久,都沒找到。 還有第五步中的乙醇用的是無水乙醇嗎? 請做過這個實驗的大俠指點一下。 |
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