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【其他】高效液相（HPLC）流動(dòng)相乙腈與甲醇的區(qū)別 已有31人參與
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高效液相（HPLC）流動(dòng)相乙腈與甲醇的區(qū)別 HPLC, 液相, 甲醇, 乙腈 摘自：http://www.biowww.com.cn/shiyan/safe/1970.html 1.吸光度：乙腈HPLC吸收最小（特別是在短波長上�。�。所謂HPLC級是除去具有吸收UV的雜質(zhì)，在規(guī)定的波長上吸光度限制在規(guī)格值以內(nèi)。在UV檢測時(shí)，產(chǎn)生的噪聲小，因此在進(jìn)行UV短波長上的高靈敏度分析時(shí)乙腈HPLC級最適宜。另外，在UV檢測中的梯度基線上也是乙腈HPLC級產(chǎn)生鬼峰少，雖然，其他與水相溶性高的有機(jī)溶劑有各種各樣，但很難能找到比乙腈HPLC級吸收更小的。 2.壓力：乙腈低。根據(jù)有機(jī)溶劑的種類或混合比率的不同而異,水/乙腈,水/甲醇混合液的比率與輸液壓力的關(guān)系中,甲醇與水混合,壓力增高,而乙腈同樣與水混合且并不如此.所以,乙腈一方,在同樣的流速下不在柱內(nèi)加上多余的壓力.從上述兩項(xiàng),可以確認(rèn)使用乙腈的意義,那么,甲醇除了價(jià)格以外,還有沒有其化優(yōu)點(diǎn)呢? 3.洗脫能力：一般而言,乙腈較強(qiáng).乙腈和甲醇分別用同樣的比率與水混合時(shí),一般情況下,乙腈的洗脫能力強(qiáng).特別是混合比率低時(shí),從咖啡因和苯酚的洗脫來看,獲得同樣的保留時(shí)間,乙腈的比率,只需甲醇的比率的一半以下即可.另一方面,有機(jī)溶劑100%或與此極接近時(shí),從胡蘿卜素和膽甾醇來看,常常都是甲醇的洗脫能力強(qiáng).混合比在50比1等較為特殊時(shí),調(diào)制的誤差大,影響保留時(shí)間,或平衡化的時(shí)間長,乙腈遇到這種情況時(shí),用甲醇的10比1混合代替乙腈,這樣操作方便些.溶劑受溫度影響時(shí),不采用容器定量,而采用重量的方法(考慮比重),可使混合比的誤差減小. 4.分離(洗脫)的選擇性.兩者的差異：乙腈和甲醇在分離的選擇性上不同.由于有機(jī)溶劑分子的化學(xué)性質(zhì)(甲醇和乙醇是質(zhì)子性,乙腈和四氫呋喃是非質(zhì)子性)不同所致.因此,在用乙腈類不能獲得分離的選擇性,就試用甲醇類看看. 5.峰形：用時(shí)出現(xiàn)差異.像水楊酸化合物(在鄰位上具有羧基或甲氧基的苯酚化合物)等,用乙腈類時(shí)拖尾大,用甲醇類可抑制.可是,一般情況下,聚合物類反相柱,與硅膠柱相比,更具有峰形寬的傾向,特別是用聚苯乙烯分析柱芳香族化合物等時(shí)常見.這在流動(dòng)相是甲醇時(shí)非常顯著,而用乙腈時(shí)不明顯.為此,用聚合物類反相用柱時(shí)建議采用后者(乙腈類),這是因?yàn)橐译媸鼓z膨潤. 6.流動(dòng)相的脫氣：甲醇與水混合時(shí)發(fā)熱,多余的溶解空氣較易變?yōu)槊摮鰵馀?脫氣容易).而乙腈由于吸熱冷卻,隨著慢慢回到室溫,產(chǎn)生氣泡,所以要考慮脫氣 (加溫?cái)嚢?過濾膜,He脫氣等). 結(jié)論：以上反相色譜法流動(dòng)相常用的乙腈和甲醇進(jìn)行了比較.粗略地講是,使用乙腈HPLC級最好,在選擇性,峰形差時(shí)試用甲醇HPLC,但根據(jù)各種不用性質(zhì)設(shè)計(jì)分析條件也是必要的。 針對乙腈漲價(jià)的對應(yīng)方案：使用甲醇代替乙腈做流動(dòng)相 來源：島津 閱讀數(shù):498 時(shí)間：2009-03-20 HPLC的流動(dòng)相并不是單一的，如果選擇流動(dòng)相不當(dāng)，不僅無法得到另人滿意的分離效果，也會(huì)是色譜柱受到損壞，根據(jù)情況的不同也可能引起其他事故。選擇流動(dòng)相的時(shí)候，我們通常應(yīng)該考慮到以下因素： 1. 能夠適當(dāng)溶解樣品，并且與非樣品不發(fā)生反應(yīng) 2. 與其他使用的流動(dòng)相能混合 3. 粘度低，不為柱子增添其他負(fù)擔(dān) 4. 用UV檢測器檢測時(shí)，樣品的檢測波長里沒有UV的吸收 5. 用RI檢測器檢測時(shí)，樣品的屈折率與流動(dòng)相的曲折率差別明顯 6. 沸點(diǎn)與分析溫度之間要有一定差距，避免產(chǎn)生氣泡 7. 不容易引燃，爆炸 8. 對人體無毒 9. 廉價(jià) 大多數(shù)用戶都會(huì)選擇乙腈作為流動(dòng)相，因?yàn)樗弦陨洗蟛糠值臈l件。對此，我們可以稍微作一下分析。 水與有機(jī)溶劑的混合比引起的壓力變化 作為HPLC的流動(dòng)相，如果選擇粘度較高的溶劑，會(huì)在分析時(shí)產(chǎn)生很高的壓力，導(dǎo)致柱子的損壞加快。在有機(jī)溶劑與水混合的時(shí)候，根據(jù)混合比例的不同，所產(chǎn)生的粘度（=壓力）的比例也會(huì)不同。以下圖的甲醇為例，最高可達(dá)1.8倍于100%水溶液時(shí)候的壓力。  考慮的色譜柱的壽命，在選擇流動(dòng)相時(shí)，我們應(yīng)該盡量避免選擇高壓力的流動(dòng)相；但若已經(jīng)在使用了這樣的流動(dòng)相的情況下，我們依然可以通過選擇低壓力的色譜柱來彌補(bǔ)流動(dòng)相在壓力方面表現(xiàn)的不足。 HPLC中使用的有機(jī)溶劑的紫外吸收特性  UV檢測器或熒光檢測器使用的時(shí)候需要注意的是，由于溶劑的不同可測定的波長范圍也有所不同，使用的溶劑自身也有吸收特性，導(dǎo)致基線漂移，或者樣品不出峰的情況。在下圖中列出了HPLC常用的一些有機(jī)溶劑的紫外吸收特性，如果說UV檢測中最普遍被用到的波長為254nm的話，苯（倒數(shù)第三行）與甲苯（倒數(shù)第二行）的透過率就很顯然不符合要求。而乙腈（第一行）和甲醇（第三行）都能符合要求。 關(guān)于溶劑的等級 一般在市面上，有機(jī)溶劑分為一級，特級，色譜級，熒光分析用等各種各樣的等級。不同的等級中雜質(zhì)含量以及安定劑與添加物的標(biāo)準(zhǔn)都有區(qū)分，這些雜質(zhì)或者添加劑也有紫外吸收，之前也提到了在選擇溶劑的時(shí)候要考慮到紫外吸收方面的因素，自然的，在溶劑的等級上也要注意。 不同等級的甲醇的紫外吸收曲線圖，基本上等級對于甲醇在紫外吸收度上的影響不大  右圖是乙腈的吸光度顯示圖。與甲醇不同的是，特級乙腈和色譜級乙腈在低波長段里的吸光度大不相同，如果在這個(gè)波長段的話一定要謹(jǐn)慎選擇溶劑的等級。  根據(jù)溶劑的等級不同，紫外吸收波長的差異也不同。下圖通過只能低波長段檢測的脂肪酸的甲脂類，對其進(jìn)行梯度分析，確定了雜質(zhì)對分析的實(shí)際影響。可以看到，色譜級的乙腈沒有產(chǎn)生太大的基線漂移，而特級乙腈的基線則是相當(dāng)?shù)牟环�(wěn)定。 色譜級乙腈  特級乙腈 Column：Inertsil ODS-2 5µm Eluent：A.CH3CN/H2O＝40/60 B.CH3CN A.100％→B.100％（20min） Flow rate：1.0mL/min Detector：UV220nm Col.Temp.：40° Sample： 1.Methyl Butyrate 2.Methyl Valerate 3.Methyl Caproate 4.Methyl Enanthate 5.Methyl Caprylate 6.Methyl Caprate 7.Methyl Laurate 總結(jié)： 作為HPLC的流動(dòng)相，乙腈在各方面都比較出色，但是色譜級的乙腈成本較高，普通等級的乙腈效果又遠(yuǎn)不如色譜級，而且有毒性也是乙腈的一個(gè)缺點(diǎn)。 甲醇沒有毒性，價(jià)格比起乙腈也相當(dāng)廉價(jià)，在吸光度等各方面的表現(xiàn)也毫不遜色。盡管使用時(shí)對柱子的壓力較大，但若能使用普遍壓力較低的色譜柱，依然可以達(dá)到理想的分析效果。 http://hi.baidu.com/z9power/blog/item/98b5d4b403d63a7f8ad4b273.html [ Last edited by shooseal on 2010-4-9 at 19:11 ] |
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