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shooseal木蟲 (著名寫手)
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【其他】高效液相（HPLC）流動相乙腈與甲醇的區(qū)別 已有31人參與
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高效液相（HPLC）流動相乙腈與甲醇的區(qū)別 HPLC, 液相, 甲醇, 乙腈 摘自：http://www.biowww.com.cn/shiyan/safe/1970.html 1.吸光度：乙腈HPLC吸收最�。ㄌ貏e是在短波長上小）。所謂HPLC級是除去具有吸收UV的雜質(zhì)，在規(guī)定的波長上吸光度限制在規(guī)格值以內(nèi)。在UV檢測時，產(chǎn)生的噪聲小，因此在進(jìn)行UV短波長上的高靈敏度分析時乙腈HPLC級最適宜。另外，在UV檢測中的梯度基線上也是乙腈HPLC級產(chǎn)生鬼峰少，雖然，其他與水相溶性高的有機溶劑有各種各樣，但很難能找到比乙腈HPLC級吸收更小的。 2.壓力：乙腈低。根據(jù)有機溶劑的種類或混合比率的不同而異,水/乙腈,水/甲醇混合液的比率與輸液壓力的關(guān)系中,甲醇與水混合,壓力增高,而乙腈同樣與水混合且并不如此.所以,乙腈一方,在同樣的流速下不在柱內(nèi)加上多余的壓力.從上述兩項,可以確認(rèn)使用乙腈的意義,那么,甲醇除了價格以外,還有沒有其化優(yōu)點呢? 3.洗脫能力：一般而言,乙腈較強.乙腈和甲醇分別用同樣的比率與水混合時,一般情況下,乙腈的洗脫能力強.特別是混合比率低時,從咖啡因和苯酚的洗脫來看,獲得同樣的保留時間,乙腈的比率,只需甲醇的比率的一半以下即可.另一方面,有機溶劑100%或與此極接近時,從胡蘿卜素和膽甾醇來看,常常都是甲醇的洗脫能力強.混合比在50比1等較為特殊時,調(diào)制的誤差大,影響保留時間,或平衡化的時間長,乙腈遇到這種情況時,用甲醇的10比1混合代替乙腈,這樣操作方便些.溶劑受溫度影響時,不采用容器定量,而采用重量的方法(考慮比重),可使混合比的誤差減小. 4.分離(洗脫)的選擇性.兩者的差異：乙腈和甲醇在分離的選擇性上不同.由于有機溶劑分子的化學(xué)性質(zhì)(甲醇和乙醇是質(zhì)子性,乙腈和四氫呋喃是非質(zhì)子性)不同所致.因此,在用乙腈類不能獲得分離的選擇性,就試用甲醇類看看. 5.峰形：用時出現(xiàn)差異.像水楊酸化合物(在鄰位上具有羧基或甲氧基的苯酚化合物)等,用乙腈類時拖尾大,用甲醇類可抑制.可是,一般情況下,聚合物類反相柱,與硅膠柱相比,更具有峰形寬的傾向,特別是用聚苯乙烯分析柱芳香族化合物等時常見.這在流動相是甲醇時非常顯著,而用乙腈時不明顯.為此,用聚合物類反相用柱時建議采用后者(乙腈類),這是因為乙腈使凝膠膨潤. 6.流動相的脫氣：甲醇與水混合時發(fā)熱,多余的溶解空氣較易變?yōu)槊摮鰵馀?脫氣容易).而乙腈由于吸熱冷卻,隨著慢慢回到室溫,產(chǎn)生氣泡,所以要考慮脫氣 (加溫攪拌,過濾膜,He脫氣等). 結(jié)論：以上反相色譜法流動相常用的乙腈和甲醇進(jìn)行了比較.粗略地講是,使用乙腈HPLC級最好,在選擇性,峰形差時試用甲醇HPLC,但根據(jù)各種不用性質(zhì)設(shè)計分析條件也是必要的。 針對乙腈漲價的對應(yīng)方案：使用甲醇代替乙腈做流動相 來源：島津 閱讀數(shù):498 時間：2009-03-20 HPLC的流動相并不是單一的，如果選擇流動相不當(dāng)，不僅無法得到另人滿意的分離效果，也會是色譜柱受到損壞，根據(jù)情況的不同也可能引起其他事故。選擇流動相的時候，我們通常應(yīng)該考慮到以下因素： 1. 能夠適當(dāng)溶解樣品，并且與非樣品不發(fā)生反應(yīng) 2. 與其他使用的流動相能混合 3. 粘度低，不為柱子增添其他負(fù)擔(dān) 4. 用UV檢測器檢測時，樣品的檢測波長里沒有UV的吸收 5. 用RI檢測器檢測時，樣品的屈折率與流動相的曲折率差別明顯 6. 沸點與分析溫度之間要有一定差距，避免產(chǎn)生氣泡 7. 不容易引燃，爆炸 8. 對人體無毒 9. 廉價 大多數(shù)用戶都會選擇乙腈作為流動相，因為它符合以上大部分的條件。對此，我們可以稍微作一下分析。 水與有機溶劑的混合比引起的壓力變化 作為HPLC的流動相，如果選擇粘度較高的溶劑，會在分析時產(chǎn)生很高的壓力，導(dǎo)致柱子的損壞加快。在有機溶劑與水混合的時候，根據(jù)混合比例的不同，所產(chǎn)生的粘度（=壓力）的比例也會不同。以下圖的甲醇為例，最高可達(dá)1.8倍于100%水溶液時候的壓力。  考慮的色譜柱的壽命，在選擇流動相時，我們應(yīng)該盡量避免選擇高壓力的流動相；但若已經(jīng)在使用了這樣的流動相的情況下，我們依然可以通過選擇低壓力的色譜柱來彌補流動相在壓力方面表現(xiàn)的不足。 HPLC中使用的有機溶劑的紫外吸收特性  UV檢測器或熒光檢測器使用的時候需要注意的是，由于溶劑的不同可測定的波長范圍也有所不同，使用的溶劑自身也有吸收特性，導(dǎo)致基線漂移，或者樣品不出峰的情況。在下圖中列出了HPLC常用的一些有機溶劑的紫外吸收特性，如果說UV檢測中最普遍被用到的波長為254nm的話，苯（倒數(shù)第三行）與甲苯（倒數(shù)第二行）的透過率就很顯然不符合要求。而乙腈（第一行）和甲醇（第三行）都能符合要求。 關(guān)于溶劑的等級 一般在市面上，有機溶劑分為一級，特級，色譜級，熒光分析用等各種各樣的等級。不同的等級中雜質(zhì)含量以及安定劑與添加物的標(biāo)準(zhǔn)都有區(qū)分，這些雜質(zhì)或者添加劑也有紫外吸收，之前也提到了在選擇溶劑的時候要考慮到紫外吸收方面的因素，自然的，在溶劑的等級上也要注意。 不同等級的甲醇的紫外吸收曲線圖，基本上等級對于甲醇在紫外吸收度上的影響不大  右圖是乙腈的吸光度顯示圖。與甲醇不同的是，特級乙腈和色譜級乙腈在低波長段里的吸光度大不相同，如果在這個波長段的話一定要謹(jǐn)慎選擇溶劑的等級。  根據(jù)溶劑的等級不同，紫外吸收波長的差異也不同。下圖通過只能低波長段檢測的脂肪酸的甲脂類，對其進(jìn)行梯度分析，確定了雜質(zhì)對分析的實際影響�？梢钥吹�，色譜級的乙腈沒有產(chǎn)生太大的基線漂移，而特級乙腈的基線則是相當(dāng)?shù)牟环�(wěn)定。 色譜級乙腈  特級乙腈 Column：Inertsil ODS-2 5µm Eluent：A.CH3CN/H2O＝40/60 B.CH3CN A.100％→B.100％（20min） Flow rate：1.0mL/min Detector：UV220nm Col.Temp.：40° Sample： 1.Methyl Butyrate 2.Methyl Valerate 3.Methyl Caproate 4.Methyl Enanthate 5.Methyl Caprylate 6.Methyl Caprate 7.Methyl Laurate 總結(jié)： 作為HPLC的流動相，乙腈在各方面都比較出色，但是色譜級的乙腈成本較高，普通等級的乙腈效果又遠(yuǎn)不如色譜級，而且有毒性也是乙腈的一個缺點。 甲醇沒有毒性，價格比起乙腈也相當(dāng)廉價，在吸光度等各方面的表現(xiàn)也毫不遜色。盡管使用時對柱子的壓力較大，但若能使用普遍壓力較低的色譜柱，依然可以達(dá)到理想的分析效果。 http://hi.baidu.com/z9power/blog/item/98b5d4b403d63a7f8ad4b273.html [ Last edited by shooseal on 2010-4-9 at 19:11 ] |
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