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cpn木蟲 (正式寫手)
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[交流]
【求助/交流】難看的瓊脂糖電泳譜圖 已有8人參與
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最近跑的瓊脂糖電泳譜圖奇丑無比。  用的別人的1*TAE，0.7%Agarose，100V恒壓跑半個小時（電流從110mA增大到最后140mA）。 染料是一個國產(chǎn)的牌子，Genefinder，預(yù)加在膠里的。 瓊脂糖用的biowest。 圖上兩個條帶都是marker，最右邊是1kb的marker，往左是hind III lambda DNA marker（Takara的）。 條帶都有不同程度拖尾變形，1kb marker的條帶看上去還有些彌散。 怎樣改善？非常感謝！ |
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shengwufenzi
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2樓2010-04-26 21:19:11
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3樓2010-04-26 21:24:43
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4樓2010-04-26 21:42:07
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cpn(金幣+2):其實我也懷疑是染料的問題，我們實驗室不止我，沒人跑出好看的條帶。但其它實驗室用EB跑出來的就很好。 2010-04-27 15:51
cpn(金幣+5):確實是用的genefinder染料的問題，加在膠里跑似乎對膠的影響很大，改用預(yù)染后上樣，效果就改善很多了，不過條帶亮度就暗了不少，marker里最大的片段似乎有點輕微的彌散。 2010-05-01 21:14
cpn: 回帖置頂 2012-08-13 15:07:47
cpn(金幣+5):確實是用的genefinder染料的問題，加在膠里跑似乎對膠的影響很大，改用預(yù)染后上樣，效果就改善很多了，不過條帶亮度就暗了不少，marker里最大的片段似乎有點輕微的彌散。 2010-05-01 21:14
cpn: 回帖置頂 2012-08-13 15:07:47
| 我估計很有可能是染料的問題，我以前也用過什么花青素之類的，跑出來很難看，懷疑了很多，最后用EB，一切正常了，所以說，還是EB好，其他的像sybergreen,也還好，就是很貴，其實也有毒。 |
6樓2010-04-27 08:56:17
7樓2010-04-27 16:30:03
poog502
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cpn(金幣+1):biorad的電泳儀，電流我只是設(shè)了個上限不讓它超過而已，但是它自己確實是會慢慢增大的。我們這有個專門做核酸的實驗室，他們跑跟我一樣條件，只有染料不一樣的情況下，電流也是有100多mA。瓊脂糖的濃度感覺應(yīng)該不是主要問題，濃度太低會造成彌散么？ 2010-04-27 19:43
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1、首先是恒壓電泳，沒聽說變壓跑電泳的。 2、其次是電流恒定，100伏電壓要用到110mA的電流嗎？電流太高了... 通常用120V，50mA足夠（當(dāng)然是根據(jù)膠、電泳槽等大小而適當(dāng)調(diào)整）。 3、染料的話，當(dāng)然還是EB好，不過致癌的。其他染料也行，比如我們現(xiàn)在用GELRED，中文是熒光泰，跑電泳效果也不錯，據(jù)說沒毒，不過價格對得起人。 4、膠的濃度有點小了，偶們通常用1%瓊脂糖。根據(jù)你的片段大小做調(diào)整。 [ Last edited by poog502 on 2010-4-27 at 16:41 ] |
8樓2010-04-27 16:38:23
gaiyf
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9樓2010-04-27 16:53:39
lyg7720349
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10樓2010-04-27 18:41:35
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