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cpn木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[交流]
【求助/交流】難看的瓊脂糖電泳譜圖 已有8人參與
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最近跑的瓊脂糖電泳譜圖奇丑無(wú)比。  用的別人的1*TAE，0.7%Agarose，100V恒壓跑半個(gè)小時(shí)（電流從110mA增大到最后140mA）。 染料是一個(gè)國(guó)產(chǎn)的牌子，Genefinder，預(yù)加在膠里的。 瓊脂糖用的biowest。 圖上兩個(gè)條帶都是marker，最右邊是1kb的marker，往左是hind III lambda DNA marker（Takara的）。 條帶都有不同程度拖尾變形，1kb marker的條帶看上去還有些彌散。 怎樣改善？非常感謝！ |
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poog502
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cpn(金幣+1):biorad的電泳儀，電流我只是設(shè)了個(gè)上限不讓它超過(guò)而已，但是它自己確實(shí)是會(huì)慢慢增大的。我們這有個(gè)專(zhuān)門(mén)做核酸的實(shí)驗(yàn)室，他們跑跟我一樣條件，只有染料不一樣的情況下，電流也是有100多mA。瓊脂糖的濃度感覺(jué)應(yīng)該不是主要問(wèn)題，濃度太低會(huì)造成彌散么？ 2010-04-27 19:43
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1、首先是恒壓電泳，沒(méi)聽(tīng)說(shuō)變壓跑電泳的。 2、其次是電流恒定，100伏電壓要用到110mA的電流嗎？電流太高了... 通常用120V，50mA足夠（當(dāng)然是根據(jù)膠、電泳槽等大小而適當(dāng)調(diào)整）。 3、染料的話，當(dāng)然還是EB好，不過(guò)致癌的。其他染料也行，比如我們現(xiàn)在用GELRED，中文是熒光泰，跑電泳效果也不錯(cuò)，據(jù)說(shuō)沒(méi)毒，不過(guò)價(jià)格對(duì)得起人。 4、膠的濃度有點(diǎn)小了，偶們通常用1%瓊脂糖。根據(jù)你的片段大小做調(diào)整。 [ Last edited by poog502 on 2010-4-27 at 16:41 ] |
8樓2010-04-27 16:38:23
shengwufenzi
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3樓2010-04-26 21:24:43
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4樓2010-04-26 21:42:07
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