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proteinwang銅蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[交流]
【求助/交流】考馬斯亮蘭法（Bradford法）測(cè)定蛋白濃度事宜請(qǐng)教！ 已有7人參與
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前段時(shí)間做考馬斯亮蘭法（Bradford法）測(cè)定蛋白濃度時(shí)，測(cè)定OD595nm處的值比較低，現(xiàn)向大家請(qǐng)教一下在此試驗(yàn)過(guò)程中的注意事項(xiàng)。 1、考馬斯亮蘭G―250染料試劑的配制過(guò)程中，考馬斯亮蘭G―250必須先溶于95%的乙醇后，再添加85%的磷酸，最后定容嗎？是不是可以把考馬斯亮蘭G―250，95%的乙醇和85%的磷酸一塊放到容器中，然后溶解后定容呢？ 2、用1.0mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液給各試管分別 加入：0、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1ml，然后用無(wú)離子水補(bǔ)充到0.1ml。最后各試管中分別加入5.0ml考馬斯亮蘭 G―250試劑，每加完一管，立即在旋渦混合器上混合，5min后測(cè)定其OD595，測(cè)得值比較低，且基本沒(méi)有規(guī)律性，不知道是什么原因？ 請(qǐng)成功做過(guò)相關(guān)實(shí)驗(yàn)的高手給予解答！ |
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stone1060
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7樓2013-07-03 14:52:10
2樓2010-04-30 19:41:33
weiyanbme
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lstt09nk(金幣+2):歡迎回來(lái)多多交流~~ 2010-04-30 20:30
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lstt09nk(金幣+2):歡迎回來(lái)多多交流~~ 2010-04-30 20:30
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看你的過(guò)程應(yīng)該是在比色皿里做的，我是用酶標(biāo)儀做的，直接在96孔板里做，你的方案我在網(wǎng)上也找到過(guò)，最后再96孔板里做的，也不是很好，后來(lái)把總體積減少了，200μl的染液，30μl的蛋白溶液，測(cè)得的結(jié)果線(xiàn)性還是不錯(cuò)的；當(dāng)然有時(shí)候你做出趨勢(shì)曲線(xiàn)后，發(fā)現(xiàn)要測(cè)得的蛋白濃度無(wú)法計(jì)算，就是說(shuō)你的稀釋度還要降低，所以一般最少要做個(gè)0.1以及1.0的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn) 另外，我配制的染液根本沒(méi)定容，直接用量筒量取體積數(shù)，做的結(jié)果線(xiàn)性還是不錯(cuò)的，最后的濃度也跟我用其他的方法相差不大； 建議再做一次，本來(lái)這個(gè)方法就不是很精確的，看看文獻(xiàn)，多是BCA法，為什么不出現(xiàn)這個(gè)方法呢？想想就明白了，這個(gè)方法也就平時(shí)做起來(lái)簡(jiǎn)單些，要發(fā)paper還是的得試劑盒了 |
3樓2010-04-30 19:44:11
richujs
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4樓2010-05-01 10:32:34
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