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proteinwang銅蟲 (正式寫手)
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[交流]
【求助/交流】考馬斯亮蘭法（Bradford法）測定蛋白濃度事宜請教！ 已有7人參與
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前段時間做考馬斯亮蘭法（Bradford法）測定蛋白濃度時，測定OD595nm處的值比較低，現(xiàn)向大家請教一下在此試驗過程中的注意事項。 1、考馬斯亮蘭G―250染料試劑的配制過程中，考馬斯亮蘭G―250必須先溶于95%的乙醇后，再添加85%的磷酸，最后定容嗎？是不是可以把考馬斯亮蘭G―250，95%的乙醇和85%的磷酸一塊放到容器中，然后溶解后定容呢？ 2、用1.0mg/ml的標準蛋白質(zhì)溶液給各試管分別 加入：0、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1ml，然后用無離子水補充到0.1ml。最后各試管中分別加入5.0ml考馬斯亮蘭 G―250試劑，每加完一管，立即在旋渦混合器上混合，5min后測定其OD595，測得值比較低，且基本沒有規(guī)律性，不知道是什么原因？ 請成功做過相關(guān)實驗的高手給予解答！ |
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2樓2010-04-30 19:41:33
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lstt09nk(金幣+2):歡迎回來多多交流~~ 2010-04-30 20:30
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lstt09nk(金幣+2):歡迎回來多多交流~~ 2010-04-30 20:30
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看你的過程應(yīng)該是在比色皿里做的，我是用酶標儀做的，直接在96孔板里做，你的方案我在網(wǎng)上也找到過，最后再96孔板里做的，也不是很好，后來把總體積減少了，200μl的染液，30μl的蛋白溶液，測得的結(jié)果線性還是不錯的；當然有時候你做出趨勢曲線后，發(fā)現(xiàn)要測得的蛋白濃度無法計算，就是說你的稀釋度還要降低，所以一般最少要做個0.1以及1.0的標準曲線 另外，我配制的染液根本沒定容，直接用量筒量取體積數(shù)，做的結(jié)果線性還是不錯的，最后的濃度也跟我用其他的方法相差不大； 建議再做一次，本來這個方法就不是很精確的，看看文獻，多是BCA法，為什么不出現(xiàn)這個方法呢？想想就明白了，這個方法也就平時做起來簡單些，要發(fā)paper還是的得試劑盒了 |
3樓2010-04-30 19:44:11
richujs
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