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王珊珊1987銅蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】生孢梭菌計(jì)數(shù) 已有4人參與
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請問生孢梭菌的計(jì)數(shù)方法是什么呢?我要做無菌檢查。謝謝各位。 在操作規(guī)范中的無菌檢查中有這樣的描述:生孢梭菌的新鮮培養(yǎng)物少許接種至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中,培養(yǎng)18-27h.........上述培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每毫升含菌小于100菌落形成單位i的菌懸液 請問每毫升含菌小于100菌落形成單位i的菌懸液要怎么得知呢?是做計(jì)數(shù)嗎?怎么做呢 [ Last edited by 王珊珊1987 on 2010-5-4 at 16:36 ] |
無菌檢查 |
鐵桿木蟲 (正式寫手)
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你是在藥廠工作的?恩,菌懸液的濃度要求的確是每毫升小于100cfu,但是最好在50到100cfu之間,小于50的話容易出現(xiàn)假陰性。還有你是要做無菌的方法驗(yàn)證還是無菌培養(yǎng)基的靈敏度檢查呢?至于確定菌的量,是在硫乙醇中計(jì)數(shù)的。 其實(shí)無菌方法驗(yàn)證中的菌懸液的制備也是依中國藥典(2005年版二部)附錄XI H無菌檢查法中“培養(yǎng)基靈敏度檢查”項(xiàng)下的方法,制備成小于100 CFU/ml的對照用菌液。所以無論你做什么,菌懸液的制備方法都是一樣的。 具體方法就是,先把生孢梭菌在硫乙醇中培養(yǎng)24小時,然后吸取1毫升培養(yǎng)液用生理鹽水進(jìn)行10倍稀釋,我的經(jīng)驗(yàn)是,稀釋到10的-7次方就是在100cfu以下了(這個你得自己多做幾次平行實(shí)驗(yàn)或驗(yàn)證實(shí)驗(yàn),看到底稀釋到多少倍。最初不好把握的時候可以同時培養(yǎng)幾個臨近的梯度),然后取至少200ml的硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基到試管里(要求無菌),然后接種1ml制備好的菌懸液到硫乙醇試管里,在32.5度下培養(yǎng)18h,然后開始計(jì)數(shù)。生孢梭菌在液體的硫乙醇里會長成梭子一樣的單個菌落,這時拿的時候千萬不要震動,然后開始計(jì)數(shù)(一個單獨(dú)的“梭子”計(jì)一個菌落)。 注:如果培養(yǎng)時間太長會產(chǎn)生渾濁,不便于計(jì)數(shù)。如果震動試管也會渾濁。硫乙醇的量盡量大一點(diǎn),這樣便于計(jì)數(shù)。 一些具體的東西,還需要你實(shí)際去操作后,發(fā)現(xiàn)問題,再解決問題。貌似你現(xiàn)在的經(jīng)驗(yàn)不是很足,最好的是找個懂的人帶你做幾次,或去別的公司或研究所參觀學(xué)習(xí),這樣學(xué)起來會快一點(diǎn)。最后祝賀你成功。 |

金蟲 (正式寫手)

鐵蟲 (小有名氣)
銅蟲 (小有名氣)
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