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王珊珊1987銅蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】生孢梭菌計數(shù) 已有4人參與
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請問生孢梭菌的計數(shù)方法是什么呢？我要做無菌檢查。謝謝各位。 在操作規(guī)范中的無菌檢查中有這樣的描述：生孢梭菌的新鮮培養(yǎng)物少許接種至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)18-27h.........上述培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每毫升含菌小于100菌落形成單位i的菌懸液 請問每毫升含菌小于100菌落形成單位i的菌懸液要怎么得知呢？是做計數(shù)嗎？怎么做呢 [ Last edited by 王珊珊1987 on 2010-5-4 at 16:36 ] |
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 無菌檢查 |
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王珊珊1987
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amisking(金幣+6):good！ 2010-05-04 20:50:59
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
amisking(金幣+6):good！ 2010-05-04 20:50:59
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你是在藥廠工作的？恩，菌懸液的濃度要求的確是每毫升小于100cfu，但是最好在50到100cfu之間，小于50的話容易出現(xiàn)假陰性。還有你是要做無菌的方法驗證還是無菌培養(yǎng)基的靈敏度檢查呢？至于確定菌的量，是在硫乙醇中計數(shù)的。 其實無菌方法驗證中的菌懸液的制備也是依中國藥典（2005年版二部）附錄XI H無菌檢查法中“培養(yǎng)基靈敏度檢查”項下的方法，制備成小于100 CFU/ml的對照用菌液。所以無論你做什么，菌懸液的制備方法都是一樣的。 具體方法就是，先把生孢梭菌在硫乙醇中培養(yǎng)24小時，然后吸取1毫升培養(yǎng)液用生理鹽水進行10倍稀釋，我的經(jīng)驗是，稀釋到10的-7次方就是在100cfu以下了（這個你得自己多做幾次平行實驗或驗證實驗，看到底稀釋到多少倍。最初不好把握的時候可以同時培養(yǎng)幾個臨近的梯度），然后取至少200ml的硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基到試管里（要求無菌），然后接種1ml制備好的菌懸液到硫乙醇試管里，在32.5度下培養(yǎng)18h，然后開始計數(shù)。生孢梭菌在液體的硫乙醇里會長成梭子一樣的單個菌落，這時拿的時候千萬不要震動，然后開始計數(shù)（一個單獨的“梭子”計一個菌落）。 注：如果培養(yǎng)時間太長會產(chǎn)生渾濁，不便于計數(shù)。如果震動試管也會渾濁。硫乙醇的量盡量大一點，這樣便于計數(shù)。 一些具體的東西，還需要你實際去操作后，發(fā)現(xiàn)問題，再解決問題。貌似你現(xiàn)在的經(jīng)驗不是很足，最好的是找個懂的人帶你做幾次，或去別的公司或研究所參觀學(xué)習(xí)，這樣學(xué)起來會快一點。最后祝賀你成功。 |
3樓2010-05-04 17:34:39
zxl493
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4樓2010-05-05 00:15:39
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