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[交流]
【求助/交流】蛋白誘導(dǎo)問題咨詢 已有10人參與
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| 大家好，最近做蛋白誘導(dǎo)遇到一些問題，Western blot 檢測(cè)有目的蛋白表達(dá)，但SDS-PAGE檢測(cè)則看不到明顯的目的條帶，已經(jīng)多次優(yōu)化條件，但沒有效果，希望大家多多幫忙，謝謝！ |
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todouhy
銅蟲 (小有名氣)
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2樓2010-05-05 21:32:53
dfl204
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3樓2010-05-05 21:41:21
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4樓2010-05-05 21:42:31
段家一凡
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5樓2010-05-06 00:00:16
zjzz
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小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
plantaqp(金幣+5):謝謝交流 2010-05-06 03:23:36
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plantaqp(金幣+5):謝謝交流 2010-05-06 03:23:36
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還應(yīng)該分析一下你的基因，是不是有穿膜結(jié)構(gòu)，定位在膜上了，如果是這樣就麻煩了。我有個(gè)蛋白表達(dá)也是換了3種菌株，因?yàn)橐婚_始以為是稀有密碼子含量有6%，以為是這個(gè)原因，換了+RIL的也不見好。溫度時(shí)間IPTG濃度之類的也換個(gè)好多條件。用SDSPAGE就是檢測(cè)不出來 后來分析了序列竟然有7個(gè)跨膜區(qū)域，覺得有可能在膜上，超聲破碎后離心，取沉淀煮煮上樣，western blot檢測(cè)，有非常特異性的帶。大小也對(duì)，估計(jì)就是我要的蛋白了。 現(xiàn)在還不知道后續(xù)怎么去純化好，純化膜蛋白就我在的實(shí)驗(yàn)室平臺(tái)來說還有些困難，先放著不甩了 |
6樓2010-05-06 01:47:23
7樓2010-05-06 10:23:27
20091357
無蟲 (初入文壇)
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лллл 8樓2010-05-06 10:25:42
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9樓2010-05-06 11:22:22
snoopyzxx
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10樓2010-05-06 11:25:05
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