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raulwen2002木蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】微生物纖維素酶活測定 已有7人參與
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| 請教各位大俠一個問題，本人目前在做纖維素降解菌對木薯渣的降解效果。使用的菌是從菌種保藏中心購買的高效纖維素降解菌，采用的方法是DNS顯色，用分光光度計測定CMC酶活和濾紙酶活時，失活酶的測定值卻高于酶酶解反應(yīng)后的值，請問誰知道可能是什么原因��？謝謝啦！ |
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raulwen2002(金幣+1): 2010-05-16 20:53:17
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目前通常以羧甲基纖維素鈉鹽（簡稱CMCNa）作為纖維素酶作用的底物。但需要指出的是CMCNa無論在結(jié)構(gòu)上還是在性質(zhì)上都不同于天然纖維素，天然纖維素不溶于水，而CMCNa有很強的親水性，非常容易被纖維素酶分解。在相同條件下，同一種纖維素酶分解CMCNa所產(chǎn)生的還原糖遠大于水解天然纖維素所產(chǎn)生的還原糖。 纖維素酶水解羧甲基纖維素鈉（CMCNa,[C6H9O5 (CH2COONa)]n）釋放的羧甲基還原糖，與堿性條件下的DNS試劑發(fā)生反應(yīng)，生成紅棕色的氨基化合物，該化合物在540nm下有最大光吸收，由此，可根據(jù)測得的吸光值與葡萄糖濃度的關(guān)系來計算纖維素酶的活力（CMCA）。 [ Last edited by muchong5577 on 2010-5-14 at 20:21 ] |
6樓2010-05-14 20:19:12
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| 纖維素酶是一種多組分酶，包括C1酶、CX酶和β-葡萄糖苷酶三種主要組分。其中C1酶的作用是將天然纖維素水解成無定形纖維素，CX酶的作用是將無定形纖維素繼續(xù)水解成纖維寡糖，β-葡萄糖苷酶的作用是將纖維寡糖水解成葡萄糖。纖維素酶水解纖維素產(chǎn)生的纖維二糖、葡萄糖等還原糖能將堿性條件下的3,5-二硝基水楊酸（DNS）還原，生成棕紅色的氨基化合物，在540nm波長處有最大光吸收，在一定范圍內(nèi)還原糖的量與反應(yīng)液的顏色強度呈比例關(guān)系，利用比色法測定其還原糖生成的量就可測定纖維素酶的活力。 |
7樓2010-05-14 21:25:53
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10樓2010-05-16 21:12:21
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