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天使托專家顧問(wèn) (職業(yè)作家)
T.Shen
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[交流]
【求助/交流】（5.20更新）PCR產(chǎn)物電泳沒(méi)有條帶，why? 已有10人參與
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今天偶做了一個(gè)pcr，目的片段1800多bp，退火溫度63，延伸2Min,不料做完之后電泳沒(méi)有條帶！不知道是何原因？ ps:100微升體系，10 buffer 5 DMSO 75 ddH2O dNTP 引物 模板 酶 都是2 沒(méi)有加氯化鉀，因?yàn)榻鼇?lái)實(shí)驗(yàn)室都說(shuō)加了氯化鉀做不出來(lái)！ 請(qǐng)高手幫忙分析原因？ 還有我明天想做一個(gè)梯度，不知道設(shè)幾個(gè)梯度好？還有如果做梯度的話，每一管做多少微升合適？ 謝謝高手了！ 5.20更新今天中午又去做了一個(gè)pcr，這次我做的是10微升體系的，分別用兩種酶（鼎國(guó)的和pfu酶）各做了五個(gè)梯度，54 56 58 60 62度，結(jié)果下午去跑電泳還是沒(méi)有任何條帶，我考慮到是不是引物沒(méi)有稀釋均勻的問(wèn)題，隨后又對(duì)我的引物進(jìn)行了電泳，點(diǎn)了5微升，有條帶很亮！ 目前已經(jīng)可以排除引物的問(wèn)題（因?yàn)槲乙镌O(shè)計(jì)完成后讓師姐都檢查了一下，而且今天也排除了引物稀釋均勻的問(wèn)題）； 現(xiàn)在我也不知道到底是什么問(wèn)題了？大家有什么更好的建議沒(méi)有？ 有哪位仁兄用過(guò)pcr增強(qiáng)劑? [ Last edited by 天使托 on 2010-5-20 at 18:45 ] |
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4樓2010-05-18 22:36:47
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