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瀟乾魂金蟲 (小有名氣)
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[求助]
瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產(chǎn)物出現(xiàn)雜帶
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| 我的土壤樣品擴展甲烷氧化功能基因A189f-mb661b,退火溫度都已經(jīng)達(dá)到60°C,但還是會出現(xiàn)雜帶,大概2000kb左右,我一直沒有搞明白到底怎么回事?我做過對照,拿純菌做,沒有問題。請高手幫忙解答,謝謝! |
【分子生物】EPI帖 | PCR相關(guān) |
木蟲 (正式寫手)
專家顧問 (職業(yè)作家)
T.Shen
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木蟲 (小有名氣)
金蟲 (小有名氣)
金蟲 (小有名氣)
木蟲 (小有名氣)
專家顧問 (職業(yè)作家)
T.Shen
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你的marker在哪里?目的條帶有多大?雜帶是有點多。。。 首先溫度梯度是這樣設(shè)計的,先看看你兩條引物的Tm值,之和然后除以2;比如算下來是55度,可以上下各擴4度,比如設(shè)5個梯度,可以是51 53 55 57 59,當(dāng)然了溫度梯度的間距可以小一些(退火溫度不是亂設(shè)置的); 你可以按照我說的做一下,看看哪一個溫度下條帶最亮,雜帶最少,那么就選用此溫度大量進行PCR吧。。。 |

專家顧問 (職業(yè)作家)
T.Shen
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