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瀟乾魂金蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物出現(xiàn)雜帶
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| 我的土壤樣品擴(kuò)展甲烷氧化功能基因A189f-mb661b,退火溫度都已經(jīng)達(dá)到60°C,但還是會(huì)出現(xiàn)雜帶,大概2000kb左右,我一直沒(méi)有搞明白到底怎么回事?我做過(guò)對(duì)照,拿純菌做,沒(méi)有問(wèn)題。請(qǐng)高手幫忙解答,謝謝! |
【分子生物】EPI帖 | PCR相關(guān) |
專(zhuān)家顧問(wèn) (職業(yè)作家)
T.Shen
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專(zhuān)家經(jīng)驗(yàn): +57 |
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你的marker在哪里?目的條帶有多大?雜帶是有點(diǎn)多。。。 首先溫度梯度是這樣設(shè)計(jì)的,先看看你兩條引物的Tm值,之和然后除以2;比如算下來(lái)是55度,可以上下各擴(kuò)4度,比如設(shè)5個(gè)梯度,可以是51 53 55 57 59,當(dāng)然了溫度梯度的間距可以小一些(退火溫度不是亂設(shè)置的); 你可以按照我說(shuō)的做一下,看看哪一個(gè)溫度下條帶最亮,雜帶最少,那么就選用此溫度大量進(jìn)行PCR吧。。。 |

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
專(zhuān)家顧問(wèn) (職業(yè)作家)
T.Shen
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