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[交流]
【求助/交流】關(guān)于測(cè)序的問題 已有3人參與
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早上的帖子得到了各位蟲友的建議，謝謝各位。 關(guān)于測(cè)序，我還有幾個(gè)問題請(qǐng)教： 1） BigDye Terminator 操作中跑完P(guān)CR后需要提純，請(qǐng)問提純的過程中有什么需要注意的嗎？例如我們實(shí)驗(yàn)室通常用的是100%酒精60ul和125mMEDTA 5ul加到20ul PCR反應(yīng)產(chǎn)物中，然后室溫放置15分鐘（為什么？）然后4度 15000rpm 離心20分鐘,去掉上清后，再加70%酒精離心10分鐘，然后干燥，最后加25ul 去離子甲酰胺，存于-20度待測(cè)。 2）對(duì)于測(cè)序，為什么公司測(cè)的比自己測(cè)的好？測(cè)序操作中有哪些需要注意的？ 3）我的基因全長是1068bp,測(cè)序時(shí)是不是與小片斷的測(cè)序條件不同？ |
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2樓2010-05-20 15:04:13
silicare
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3樓2010-05-20 15:37:50
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lstt09nk(金幣+2):歡迎多多交流~~ 2010-05-20 21:40:54
lnwtx(金幣+1): 2010-05-21 08:46:17
lstt09nk(金幣+2):歡迎多多交流~~ 2010-05-20 21:40:54
lnwtx(金幣+1): 2010-05-21 08:46:17
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1、如果不是要長時(shí)間（幾年），大批量測(cè)序（每周都有幾十上百個(gè)），沒必要自己干，不劃算；把測(cè)序條件摸索好、固定下來花費(fèi)的時(shí)間、精力、金錢都不是小數(shù)目，測(cè)序儀更是大投入，而且摸索好了還未必傳的下去，沒必要。專業(yè)的事情就交給專業(yè)的公司去做，自己專心干一些公司做不了的更好。 2、測(cè)序公司專門干這個(gè)的，各個(gè)操作都非常熟練，各種條件也都摸透了，當(dāng)然比自己測(cè)得好。 3、1kb的與小片段沒什么不同，測(cè)雙向就行了。 |
4樓2010-05-20 16:37:45
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