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yy054120012鐵蟲 (初入文壇)
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[交流]
【求助/交流】求助：關(guān)于均一化cDNA文庫構(gòu)建和轉(zhuǎn)錄組測序的問題 已有1人參與
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想請教高手，我想構(gòu)建均一化cDNA文庫，但目前市場上沒有相關(guān)試劑盒的產(chǎn)品。請問，如何構(gòu)建，有無相關(guān)資料？ 第二，關(guān)于轉(zhuǎn)錄組測序，有幾個(gè)問題，網(wǎng)站上一般只有技術(shù)路線，但有些相關(guān)的細(xì)節(jié)沒有透露。一是mRNA反轉(zhuǎn)錄到cDNA用的是什么技術(shù)，能否保證一鏈合成的效率。二是cDNA打斷之后的分析工作是怎樣的？ |
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木蟲 (著名寫手)
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小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
scelab(金幣+5):good 2010-11-02 17:40:29
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scelab(金幣+5):good 2010-11-02 17:40:29
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第一個(gè)問題，均一化cDNA文庫，據(jù)我所知，目前主要的方法是利用DSN酶（雙鏈特異性核酸酶）來做的，具體的資料見以下鏈接 http://g.zhubajie.com/urllink.php?id=101364357fq9217ut6pxc9nm 第二個(gè)問題，如果你問的是高通量測序的話，目前轉(zhuǎn)錄組測序的大致流程是：mRNA純化——RNA打斷——反轉(zhuǎn)錄——測序接頭連接——PCR擴(kuò)增，反轉(zhuǎn)錄就是很普通的用N6 primer + superscriptII酶，一鏈合成效率還比較高，1μg total RNA起始基本上都能做成。 另外，cDNA打斷也不是不行，但是有數(shù)據(jù)表明cDNA打斷后測序的均一性不如mRNA打斷的好，所以不推薦。至于你問的分析工作...不就是mapping+組裝嘛，沒什么特別的。 |
2樓2010-11-02 17:28:14
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