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xu19850927銀蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】PCR產(chǎn)物測(cè)序出現(xiàn)雜峰過多的問題
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求助各位高手，我做的是擴(kuò)增人外周血DNA片段，用寶生物的PCR試劑，電泳圖顯示擴(kuò)增結(jié)果良好，但老師說測(cè)序結(jié)果全是雜峰和重峰，根本沒法讀序列，快急死了，請(qǐng)問可能的原因都有哪些？另外我不懂測(cè)序圖譜怎么讀，比如怎樣是突變，哪位高手能發(fā)給我篇關(guān)于測(cè)序圖譜的文章，小弟不勝感激！ |
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sherry01130
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你是直接拿PCR產(chǎn)物去測(cè)序的嗎？PCR產(chǎn)物直接測(cè)序出現(xiàn)雜峰的原因有：一，PCR產(chǎn)物沒有純化回收，本身就包含了各種東西�；蛘弑旧砭陀蟹翘禺悧l帶。 二是，目的產(chǎn)物濃度過低，測(cè)序反應(yīng)比較弱。峰圖信號(hào)低，表現(xiàn)為雜峰，也就是是由于樣品信號(hào)強(qiáng)度太低，干擾信號(hào)強(qiáng)度就相對(duì)明顯了。 三是，PCR過程中出現(xiàn)錯(cuò)誤，某處的堿基丟失了，于是造成樣品中一部分模板序列和另一部分模板序列在某一處后錯(cuò)開一個(gè)堿基，因此形成雜峰。 |
7樓2012-04-09 15:25:29
超然渡陳
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8樓2012-04-09 15:27:17
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