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折磨了一個月的測序-重疊峰問題！
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我最近的實驗是根據(jù)別人文獻報道的引物，P四株細菌中可能存在的一個基因。經(jīng)過摸索退火溫度，我已經(jīng)可以P出單一條帶，然后我就把PCR產(chǎn)物直接拿去測序，均顯示重疊峰嚴重，結果為雜合，比對的基因相似也很低。然后我又做了一次重復，條帶很單一，很亮，又直接拿去測序，結果相同。 所以這周我選擇克隆測序，回收片段，連接載體進行轉化，挑陽性克隆培養(yǎng)，在將菌液拿去測序前，我也用引物進行了陽性克隆鑒定，結果條帶仍舊很單一。 但是今天的測序結果出來后顯示，所有結果均為非單一克隆，其測序的套峰仍舊很嚴重！ 現(xiàn)在我很迷茫，不知道這是為什么，心情也很沮喪，還請大家多多幫助！ |
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yimingwang
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2樓2013-09-15 23:59:18
3樓2013-09-16 13:17:53
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