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履霜木蟲 (正式寫手)
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[求助]
PCR產物不做純化和膠回收，直接TA克隆可以嗎？
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如題， 我做的巢式PCR，跑膠之后亮度很好，沒有雜帶。Taq酶里面預混有染料，我能不能直接連載體做克隆，用pMD18？手邊沒有膠回收試劑盒啊。 |
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4樓2013-03-06 11:19:28
cdl007
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5樓2013-03-07 21:52:06
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9樓2013-03-27 13:33:34
2樓2013-03-05 14:58:43
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gyesang: 金幣+2, 鼓勵回帖交流經驗！ 2013-05-31 16:13:36
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做TA克隆時，直接用PCR產物跟pMD18載體連接，我的PCR產物結果較好，目標片段長度263bp，電泳時看不出非特異擴增，有引物二聚體。 克隆后，用含X-gal，IPTG，Amp的LB固體培養(yǎng)基平板篩選，看不到藍白班，但有許多單菌落，挑單菌落于含1ml LB液體培養(yǎng)基的試管中搖菌10小時，用菌液PCR檢測（所用引物于前面pcr的引物相同，反映條件也相同，只是94度預變性時間改為10分鐘）。但是檢測結果沒有目的條帶，只有100bp左右的引物二聚體。 想問問您，這是什么原因？ 非常謝謝！ |
6樓2013-03-27 13:23:02
7樓2013-03-27 13:23:44
8樓2013-03-27 13:23:57
10樓2013-03-27 15:45:20
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