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折磨了一個(gè)月的測(cè)序-重疊峰問題！
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我最近的實(shí)驗(yàn)是根據(jù)別人文獻(xiàn)報(bào)道的引物，P四株細(xì)菌中可能存在的一個(gè)基因。經(jīng)過摸索退火溫度，我已經(jīng)可以P出單一條帶，然后我就把PCR產(chǎn)物直接拿去測(cè)序，均顯示重疊峰嚴(yán)重，結(jié)果為雜合，比對(duì)的基因相似也很低。然后我又做了一次重復(fù)，條帶很單一，很亮，又直接拿去測(cè)序，結(jié)果相同。 所以這周我選擇克隆測(cè)序，回收片段，連接載體進(jìn)行轉(zhuǎn)化，挑陽(yáng)性克隆培養(yǎng)，在將菌液拿去測(cè)序前，我也用引物進(jìn)行了陽(yáng)性克隆鑒定，結(jié)果條帶仍舊很單一。 但是今天的測(cè)序結(jié)果出來(lái)后顯示，所有結(jié)果均為非單一克隆，其測(cè)序的套峰仍舊很嚴(yán)重！ 現(xiàn)在我很迷茫，不知道這是為什么，心情也很沮喪，還請(qǐng)大家多多幫助！ |
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yimingwang
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4樓2013-09-16 15:33:06
yimingwang
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2樓2013-09-15 23:59:18
3樓2013-09-16 13:17:53
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