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PCR產(chǎn)物回收測(cè)序問題
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| 我用簡(jiǎn)并引物擴(kuò)增未知基因。設(shè)計(jì)了幾對(duì)引物。都出現(xiàn)了目的條帶。發(fā)現(xiàn)其中兩對(duì)引物的產(chǎn)物長度比較長。因?yàn)槲易罱K是要拿到這個(gè)未知基因的全長。我想選擇最長的目的條帶去測(cè)序。最后用RACE擴(kuò)增全長的時(shí)候就能省點(diǎn)力氣。這樣對(duì)嗎？還有，可不可以直接膠回收純化送去測(cè)序？省掉TA克隆。我的目的片段長度1300BP.謝謝解惑。 |
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lidonghong
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2樓2012-09-06 14:22:10
【答案】應(yīng)助回帖
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| 原則上膠回收的產(chǎn)物可以直接拿去測(cè)序，可是考慮到你這個(gè)是race的中間序列，你用的兼并引物直接測(cè)序可能不一定成功，還是連到t載體上比較靠譜。另外，建議把所得到的片段大小跟你預(yù)期產(chǎn)物長度差不多的都拿去測(cè)序，這樣會(huì)比較省時(shí)間。 |
3樓2012-09-06 15:36:19
andyzhengwp
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6樓2012-09-07 10:31:37
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