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wushuwei1104銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
同源比對設(shè)計簡并引物PCR產(chǎn)物測序不符！
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找親緣關(guān)系相近的生物做基因比對，找出基因保守區(qū)，根據(jù)保守區(qū)設(shè)計合成簡并引物，PCR擴增得到單一的條帶，拿去測序，測序結(jié)果與之前比對的保守區(qū)域相似度極低�。《荚O(shè)計了10多對簡并引物，反復(fù)PCR切膠回收測序，做了半年多了。眼看著即將畢業(yè)卻沒有什么可用的結(jié)果。急呀-----！ 想請各位大仙幫幫忙，想想辦法。俺看是哪些地方的問題�。�！謝謝了�。�！ 師兄說之前從沒有出現(xiàn)過這種情況，說的我心里發(fā)毛，不知該怎么辦了�。。�！ [ Last edited by wushuwei1104 on 2012-4-12 at 13:06 ] |
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2樓2012-04-12 13:12:52
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如果是你的條帶的話，菌液應(yīng)該是非常亮的。注意引物的簡并度不能很高，最好128以內(nèi)吧。你說每次擴增都有條帶，盡量找退火溫度高的引物的進行擴增（如果是10條基因的話，可以之間組合一下試試），可以做個降落式PCR，前幾個循環(huán)退火溫度高些，然后再慢慢降低。 試驗設(shè)計方面，一定要搞清楚，這個基因在你的材料中有沒有表達。如果還是趕著要畢業(yè)的話，還是最好同時擴增其他基因，不要把所有的希望都寄托在一個基因上面。 |
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wushuwei11044樓2012-04-12 21:13:57
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