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feiyue122金蟲 (正式寫手)
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[交流]
【求助/交流】尋求原因 已有1人參與
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各位大俠：我現(xiàn)在在在做間接法測定鼠抗人IgG的效價，其主要步驟如下： 1， 包被人IgG，1微克/ml的濃度，50微升/孔，37度下，兩個小時。 2， 1%BSA封閉，60微升/孔，37度下，兩個小時，甩干，37度 3， 稀釋一系列的抗體濃度，然后按照板的位置，加入孔中，50微升/孔，37度，1個小時，洗版三次。 4， 加入HRP標記的羊抗小鼠IgG，濃度為1/5000，37度下，45分鐘。 5，洗版4~5遍，然后加如顯色液，100微升/孔，37度下，15分鐘， 6，加入終止液，50微升/空， 結(jié)果出現(xiàn)了很奇怪的現(xiàn)象，就是我的 本底OD值很高，重復了幾次實驗，其OD值都在0.2以上，有時甚至達到0.4以上， 而空白本底OD值只有0.01以上，從理論上，兩者OD值應(yīng)該是相近的，但是為什么會相差這么多啊，有誰能幫分析分析是什么原因嗎？ 本底OD值：是指我加包被了鼠抗人IgG的孔中，沒有加一抗，而是加了二抗(HRP標記的羊抗小鼠IgG)，然后加入顯色液，得的OD值 空白本底OD值：是指我加包被了鼠抗人IgG的孔中，沒有加一抗和二抗，然后加顯色液，得的OD值。 |
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nklyw
木蟲 (正式寫手)
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2樓2010-05-22 00:12:26
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