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聽雪看山木蟲 (職業(yè)作家)
西游家族之T所長
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[交流]
【求助/交流】單酶切載體竟然沒切開，尋求原因？？ 已有5人參與
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我用的載體是5500bp，酶是XmaI，去過磷酸化的。這個酶切已經(jīng)做過n多次了，插入基因就是沒辦法和載體連接上，自連現(xiàn)象嚴重。當時以為是去磷酸化步驟的問題，然后就做過2次去磷酸化。 后來在做完酶切后做了一個轉化，將50ng酶切液用電子穿孔儀轉入感受態(tài)細胞，隔夜培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)n多菌斑，那就是意味著沒有酶切成功，心里這個郁悶啊！ 我用的這個酶據(jù)說是比較難反應的，所以當時酶切都是隔夜至少10個小時以上了��！ 我現(xiàn)在真的是一點辦法也沒有了，本來就是新手，第一次做，竟然還碰到這么大的問題，3個月了，一點進展都沒有，著急�。� 懇請高手們給點建議，小蝦米在這多謝了��！ |
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